3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Instrukcja obsługi

Strona jest ładowana ...

140

3

Data wydania: 2019-01

Informacje o produkcie

Molekularny test do wykrywania 2 – Campylobacter

Opis i przeznaczenie produktu

Molekularny test 3M™ do wykrywania 2 – Campylobacter stosuje się razem z Systemem 3M™ do diagnostyki

molekularnej w celu szybkiego i swoistego wykrywania bakterii Campylobacter jejuni, Campylobacter lari i Campylobacter

coli w przednamnożonych próbkach żywności oraz środowiska przetwarzania żywności.

Molekularny test 3M do wykrywania wykorzystuje metodę pętlowej amplikacji izotermicznej do szybkiego namnażania

sekwencji kwasów nukleinowych z zachowaniem wysokiej swoistości i czułości, w połączeniu z bioluminescencją do

wykrywania amplikacji. Domniemane wyniki dodatnie przekazywane są w czasie rzeczywistym, zaś wyniki ujemne

wyświetlą się po zakończeniu testu. Domniemane wyniki dodatnie wymagają potwierdzenia preferowaną metodą lub

metodą wynikającą z lokalnych przepisów

(1,2)

.

Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter jest przeznaczony do stosowania w środowisku laboratoryjnym

przez specjalistów przeszkolonych w zakresie praktyk laboratoryjnych. Firma 3M nie udokumentowała zastosowania tego

produktu w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo rma 3M nie udokumentowała zastosowania

tego produktu do badania próbek leków, kosmetyków, próbek klinicznych ani weterynaryjnych. Molekularnego testu

3Mdo wykrywania 2 – Campylobacter nie oceniono w przypadku wszystkich możliwych produktów spożywczych,

procesów przetwarzania żywności, protokołów testowych ani w przypadku wszystkich dostępnych szczepów bakterii.

Podobnie jak w przypadku wszystkich metod testowych, pochodzenie, skład i jakość podłoża wzbogacającego może

mieć wpływ na otrzymywane wyniki. Czynniki takie jak metody pobierania próbek, protokoły przeprowadzania badań,

przygotowanie próbki, postępowanie i techniki laboratoryjne również mogą wpłynąć na wynik badania. Firma 3M zaleca

przeprowadzenie przez użytkownika oceny metody, w tym podłoża do przednamnażania, z zastosowaniem odpowiedniej

liczby próbek konkretnej żywności oraz próbek problematycznych pod względem rozwoju drobnoustrojów, aby zapewnić,

że dana metoda spełnia potrzeby użytkownika.

Firma 3M dokonała oceny Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter z zastosowaniem bulionu

wzbogacającego 3M™ Campylobacter i bulionu wzbogacającego Boltona niezawierającego krwi.

Urządzenie 3M™ do diagnostyki molekularnej należy stosować z próbkami poddanymi obróbce cieplnej na etapie lizy,

której zadaniem jest zniszczenie organizmów obecnych w próbce. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej

na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu 3M do

diagnostyki molekularnej.

Firma 3M Food Safety została wyróżniona certykatem ISO (ang. International Organization for Standardization —

Międzynarodowa Organizacja Normalizacyjna) 9001 w zakresie projektowania i wytwarzania.

Zestaw testów Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter zawiera 96 testów opisanych w Tabeli 1.

Tabela 1. Elementy zestawu Molekularnego testu 3M do wykrywania

Element Charakterystyka Liczba sztuk Zawartość Komentarze

Roztwór lizujący 3M™ (LS)

Różowy roztwór

wprzezroczystych

probówkach

96 (12 taśm z 8 probówkami)

580 μl LS na

probówkę

Ustawione

w statywie

i gotowe do

użytku

Probówki z reagentami

Molekularnego testu

3M™ do wykrywania 2 –

Campylobacter

Fioletowe probówki

96 (3 woreczki zawierające

po 4 taśmy z 8 probówkami)

Liolizowana

swoista mieszanina

do amplikacji

iwykrywania

Gotowe

doużycia

Dodatkowe korki Fioletowe korki 96 (12 taśm z 8 korkami)

Gotowe

doużycia

Kontrola 3M™

reagenta(RC)

Przezroczyste

probówki z korkiem

zatrzaskowym

16 (2 woreczki po

8oddzielnych probówek)

Liolizowane DNA

kontrolne, mieszanina

do amplikacji

iwykrywania

Gotowe

doużycia

(Polski)

PL

141

Kontrola ujemna (NC), której nie dostarczono w zestawie, to jałowe podłoże przednamnażające, np. bulion wzbogacający

3M Campylobacter. Nie stosować wody jako NC.

Skrócona instrukcja obsługi jest dostępna pod adresem: www.3M.com/foodsafety

Bezpieczeństwo

Użytkownik powinien dokładnie zapoznać się ze wszystkimi informacjami dotyczącymi bezpieczeństwa zawartymi

w instrukcji dotyczącej Systemu 3M do diagnostyki molekularnej oraz Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 –

Campylobacter i się do nich stosować. Instrukcję bezpieczeństwa należy zachować do przyszłego wykorzystania.

OSTRZEŻENIE: Oznacza niebezpieczną sytuację, której skutkiem, wrazie braku podjęcia środków

zapobiegawczych, mogą być poważne obrażenia ciała lub śmierć i/lub uszkodzenie mienia.

WAŻNA INFORMACJA: Oznacza potencjalnie niebezpieczną sytuację, której skutkiem, wrazie niepodjęcia środków

zapobiegawczych, może być uszkodzenie mienia.

W OSTRZEŻENIE

Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter nie należy stosować do diagnozowania stanu

zdrowotnego ludzi ani zwierząt.

Obowiązkiem użytkownika jest przeszkolenie personelu w zakresie aktualnych, odpowiednich technik badań: na

przykład w zakresie dobrych praktyk laboratoryjnych

(3)

, ISO/IEC 17025

(4)

lub ISO 7218

(5)

.

Aby zmniejszyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego

produktu:

• Należy postępować zgodnie z protokołem i wykonywać testy zgodnie z zaleceniami podanymi w Informacjach

o produkcie.

• Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy przechowywać w sposób podany na opakowaniu

i w Informacjach o produkcie.

• Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy stosować wyłącznie przed upływem terminu

ważności.

• Bulion wzbogacający 3M™ Campylobacter należy przygotować zgodnie z Informacjami o produkcie.

• Nie umieszczać bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter w autoklawie.

• Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy stosować w odniesieniu do próbek spożywczych

iśrodowiskowych poddanych walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.

• Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy stosować wyłącznie w połączeniu z powierzchniami,

środkami odkażającymi, protokołami i szczepami bakterii poddanymi walidacji wewnętrznej lub przez osoby trzecie.

• W przypadku próbki środowiskowej zawierającej bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu przed

rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki w 1 części jałowego

bulionu przednamnażającego). Inną możliwością jest przeniesienie 10 μl przednamnażającego buforu neutralizującego

do probówek z roztworem lizującym 3M. Produkty rmy 3M™ do postępowania z próbkami, które zawierają bufor

neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,

HS10NB2G i HS2410NB2G.

Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na substancje chemiczne i zagrożenia biologiczne:

• Badania patogenów należy prowadzić w odpowiednio wyposażonym laboratorium pod kontrolą przeszkolonego

personelu. Inkubowane podłoże przednamnażające oraz sprzęt lub powierzchnie, które mogły mieć kontakt

zinkubowanym podłożem wzbogacającym, mogą zawierać patogeny na poziomie zagrażającym ludzkiemu zdrowiu.

• Należy zawsze przestrzegać standardowych laboratoryjnych praktyk bezpieczeństwa, łącznie z noszeniem

odpowiedniej odzieży i okularów ochronnych przy pracy z reagentami i skażonymi próbkami.

• Należy unikać kontaktu z podłożem przednamnażającym oraz probówkami reagentowymi po amplikacji.

• Przednamnożone próbki należy utylizować zgodnie zobowiązującymi przepisami lokalnymi, regionalnymi, krajowymi

inormami regulacyjnymi.

• Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie

biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej.

Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:

• Należy zawsze nosić rękawiczki (aby chronić użytkownika i zapobiegać wprowadzaniu nukleaz).

Aby zmniejszyć ryzyko związane z narażeniem na gorące płyny:

• Nie przekraczać zalecanych ustawień temperatury w bloku grzewczym.

• Nie przekraczać zalecanego czasu ogrzewania.

(Polski)

PL

142

• Stosować odpowiedni, skalibrowany termometr do potwierdzenia poprawności temperatury Wkładki 3M™ bloku

grzewczego do diagnostyki molekularnej (np. termometr zanurzeniowy zanurzany częściowo lub cyfrowy termometr

ztermoogniwem, ale nie termometr zanurzeniowy zanurzany całkowicie). Termometr należy umieścić w wyznaczonym

miejscu Wkładki 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

WAŻNA INFORMACJA

Aby zmniejszyć ryzyko związane z zanieczyszczeniem krzyżowym podczas przygotowania testu:

• Zmienić rękawiczki przed nawodnieniem probówek reagentowych.

• Zaleca się stosowanie jałowych końcówek pipet do biologii molekularnej z (ltrowaną) barierą aerozolową.

• Do każdego przeniesienia próbki używać nowej końcówki pipety.

• Przy przenoszeniu próbek z buforu przednamnażającego do probówki lizującej należy przestrzegać zasad dobrej

praktyki laboratoryjnej. Aby uniknąć skażenia pipetora, użytkownik może zdecydować się dodać etap transferu

pośredniego. Przykładowo można przenieść przednamnożoną próbkę do jałowej probówki.

• W miarę możliwości należy używać stanowiska badawczego biologii molekularnej z lampą bakteriobójczą.

• Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.)

za pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.

Aby ograniczyć ryzyko związane z wynikiem fałszywie dodatnim:

• Nie otwierać probówek reagentowych po procesie amplikacji.

• Zanieczyszczone probówki należy utylizować, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze domowego

wybielacza przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.

• Nie umieszczać probówek reagentowych w autoklawie po procesie amplikacji.

Dodatkowe informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.

W przypadku pytań dotyczących konkretnych zastosowań lub procedur należy odwiedzić stronę www.3M.com/foodsafety

lub skontaktować się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem rmy 3M.

Obowiązki użytkownika

Użytkownicy są zobowiązani do zapoznania się z instrukcjami oraz informacjami dotyczącymi produktu. W celu uzyskania

dalszych informacji należy odwiedzić stronę internetową www.3M.com/foodsafety lub skontaktować się zlokalnym

przedstawicielem lub dystrybutorem rmy 3M.

Przy wyborze metody testowania należy pamiętać, że takie czynniki zewnętrzne, jak metody próbkowania, protokoły

testowania, przygotowanie próbki, dalsze postępowanie, technika laboratoryjna oraz sama próbka mogą wpływać na

uzyskiwane wyniki.

Obowiązkiem użytkownika przy wyborze jakiejkolwiek metody testowania lub produktu jest poddanie ocenie dostatecznej

liczby próbek z właściwymi macierzami i z uwzględnieniem zagrożeń powodowanych przez mikroorganizmy, tak aby

zastosowana metoda mogła spełnić oczekiwania użytkownika i ustalone przez niego kryteria.

Obowiązkiem użytkownika jest również dopilnowanie, aby zastosowane metody testowania i uzyskane wyniki spełniały

wymagania klienta i dostawcy.

Podobnie jak w przypadku każdej metody testowania wyniki uzyskiwane za pomocą produktu rmy 3M Food Safety nie

stanowią gwarancji jakości testowanych macierzy ani procesów.

Aby pomóc klientom ocenić metodę różnych macierzy spożywczych, rma 3M opracowała zestaw Kontroli

3M™macierzy do diagnostyki molekularnej. W razie potrzeby należy użyć zestawu Kontroli 3M macierzy do diagnostyki

molekularnej (MC) do ustalenia, czy dana macierz może wpływać na wyniki Molekularnego testu 3M do wykrywania

2 – Campylobacter. Należy przetestować kilka próbek reprezentatywnych dla danej macierzy, czyli na przykład próbek

pozyskanych z różnych źródeł, podczas dowolnego okresu walidacji przy stosowaniu metody rmy 3M, a także podczas

testowania nowych lub nieznanych macierzy albo macierzy, które zostały poddane zmianom (w zakresie procesowym lub

surowcowym).

Macierz można zdeniować jako typ produktu o nieodłącznych właściwościach, takich jak skład i proces wytwarzania.

Różnice pomiędzy macierzami mogą być łatwo zauważalne, jak np. efekty spowodowane różnicami w procedurach

obróbki lub prezentacji, przykładowo surowe lub pasteryzowane, świeże lub suszone itd.

(Polski)

PL

143

Wyłączenia gwarancji / Ograniczone środki zaradcze

JEŚLI NIE ZOSTAŁO TO WYRAŹNIE OKREŚLONE W ROZDZIALE DOT. OGRANICZONEJ GWARANCJI

POJEDYNCZYCH OPAKOWAŃ PRODUKTÓW, FIRMA 3M WYŁĄCZA WSZELKIE GWARANCJE WYRAŹNE

I DOROZUMIANE, W TYM MIĘDZY INNYMI WSZELKIE GWARANCJE ZGODNOŚCI Z PRZEZNACZENIEM

IPRZYDATNOŚCI DO OKREŚLONEGO CELU. W razie wad jakiegokolwiek produktu rmy 3M Food Safety rma 3M lub

jej autoryzowany dystrybutor wymieni taki produkt lub, wedle własnego uznania, zwróci koszty zakupu tego produktu.

Są to jedyne przysługujące środki zaradcze. W ciągu 60 dni od wykrycia jakiejkolwiek podejrzewanej wady produktu

należy niezwłocznie powiadomić rmę 3M oraz zwrócić produkt. W celu uzyskania informacji na temat procedury zwrotu

towarów (RGA) należy skontaktować się z biurem obsługi klienta (1-800-328-1671 na terenie USA) lub z ocjalnym

przedstawicielem ds. bezpieczeństwa żywności rmy 3M.

Ograniczenie odpowiedzialności rmy 3M

FIRMA 3M NIE BĘDZIE ODPOWIEDZIALNA ZA JAKIEKOLWIEK SZKODY ANI STRATY, ZARÓWNO BEZPOŚREDNIE,

POŚREDNIE, SZCZEGÓLNE, UBOCZNE LUB NASTĘPCZE, W TYM MIĘDZY INNYMI ZA UTRACONE ZYSKI. W żadnym

wypadku odpowiedzialność rmy 3M z mocy prawa nie może przekroczyć ceny zakupu rzekomo wadliwego produktu.

Przechowywanie i utylizacja

Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy przechowywać w temp. 2–8°C (35–47°F). Nie zamrażać.

Podczas przechowywania chronić zestaw przed światłem. Po otwarciu zestawu należy sprawdzić, czy woreczek foliowy

nie jest uszkodzony. Nie używać zestawu, jeżeli woreczek jest uszkodzony. Po otwarciu nieużywane probówki z reagentem

należy przechowywać w woreczku wielokrotnego zamknięcia z pochłaniaczem wilgoci wewnątrz, co pozwoli zachować

stabilność liolizowanych reagentów. Ponownie zamknięte woreczki można przechowywać w temp. 2–8°C (35–47°F)

maksymalnie przez 90 dni.

Nie stosować Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter po upływie daty ważności. Termin ważności

inumer partii podano na zewnętrznej etykiecie pudełka. Po użyciu podłoże przednamnażające i probówki Molekularnego

testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter mogą zawierać materiały patogenne. Po zakończeniu badania należy

stosować się do aktualnych standardów branżowych dotyczących utylizacji zanieczyszczonych odpadów. Dodatkowe

informacje oraz lokalne przepisy dotyczące utylizacji zawiera karta charakterystyki produktu.

Instrukcja użycia

Należy dokładnie przestrzegać wszystkich instrukcji. Wprzeciwnym razie wyniki mogą być niedokładne.

Należy okresowo dezynfekować stoły i sprzęt laboratoryjny (pipety, narzędzia do zakładania/zdejmowania korków itp.) za

pomocą 1–5% (obj./obj., wodnego) roztworu domowego wybielacza lub roztworu do usuwania DNA.

Użytkownik powinien ukończyć szkolenie kwalikacyjne dla użytkowników Systemu 3M do diagnostyki molekularnej (OQ),

tak jak opisano to w dokumencie „Instrukcje i protokoły dotyczące wymagań instalacji (IQ) / kwalikacji operacyjnej (OQ)

systemu 3M do diagnostyki molekularnej”

(6)

.

Przygotowanie pożywki

Bulion wzbogacający 3M™ Campylobacter (CE250) należy przygotować zgodnie z Informacjami o produkcie. Nie

umieszczać pożywki w autoklawie przed użyciem. Przygotowaną pożywkę należy wykorzystać w ciągu 24 godzin. Jeśli

przygotowany bulion nie zostanie natychmiast wykorzystany, należy go przechowywać w temperaturze 2–8°C

(7)

, bez

dostępu światła. Przed wykorzystaniem pożywki należy doprowadzić ją do temperatury 20–30°C.

Pobieranie próbek

Bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter nie należy stosować do płukania drobiu ani jako podłoże transportowe.

Próbki należy pobierać i transportować zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami.

Przednamnażanie próbki

W Tabeli 2 można znaleźć wytyczne dotyczące ogólnych protokołów przednamnażania próbek żywności i próbek

środowiskowych.

Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania lub proporcji roztworów,

aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.

Przygotowanie próbek

a. Płukanki z tusz i surowych części drobiowych

1. Przemywać jedną wypatroszoną, surową tuszę drobiową 400 ml zbuforowanej wody peptonowej (BPW) przez

jedną minutę. W przypadku surowych części mięsa drobiowego przemywać od 1,8 do 2 kg (4 lb ± 10%) elementów

drobiowych 400 ml BPW

(1,8)

.

(Polski)

PL

144

2. W przypadku tuszy drobiowej i surowych części drobiowych należy pozwolić na odcieknięcie nadmiaru płynów

przed przemywaniem próbki, aby uniknąć przeniesienia nadmiaru płynu do obróbki do torebki na próbkę

(8)

.

3. W przypadku drobiu poddanego obróbce chlorkiem cetylopirydyniowym (CPC) konieczne jest dodanie 5 ml na

litr polisorbatu 80 (IUPAC: monooleinian polioksyetylenosorbitolu (20); CAS 9005-65-6) do przygotowanego

bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter. Polisorbat 80 można dodać do wody przed sterylizacją, aby ułatwić

rozpuszczanie bądź też dodać bezpośrednio do sterylnej wody przed przygotowaniem bulionu wzbogacającego

3M Campylobacter.

4. Przenieść w warunkach aseptycznych 30 ml płukanki do sterylnej torebki i dodać 30 ml bulionu wzbogacającego

3M Campylobacter.

b. Gąbka do wymazów z tusz

1. Przed pobraniem próbki gąbka powinna być nawilżona maksymalnie 25 ml BPW

(1)

. W przypadku transportowania

próbek należy upewnić się, że torebka jest zwinięta i utrzymywana w temperaturze 2–8°C.

2. Pobrać wymaz z tuszy drobiowej lub pobrać próbkę przy pomocy gąbki.

3. Umieścić wacik w sterylnej torebce i dodać 25 ml bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter. Należy upewnić

się, że wacik lub gąbka są pokryte podłożem przednamnażającym.

c. Surowe produkty drobiowe

1. W warunkach aseptycznych odważyć 325 ± 32,5 g próbki i umieścić w sterylnej torebce. Dodać 1625 ± 32,5 ml

BPW do surowego produktu drobiowego. Aby rozbić grudki, dokładnie wymieszać, krótko masując ręcznie.

2. Po wymieszaniu umieścić 30 ml mieszaniny surowego produktu drobiowego w sterylnej torebce. Następnie dodać

30 ml bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter i dokładnie wymieszać.

d. Mięso surowe i gotowe do spożycia

1. W warunkach aseptycznych odważyć 25 g próbki i umieścić w sterylnej torebce. Zaleca się stosowanie torebki

ltrującej, aby ułatwić pobieranie próbek.

2. Dodać 225 ml bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter.

3. Masować ręcznie, aby rozbić grudki. Unikać tworzenia bąbelków przy mieszaniu. Nie poddawać torebki obróbce

w stomacherze ani mieszalniku.

e. Próbki z okładzin na buty na etapie produkcji pierwotnej

1. Pobrać próbkę z okładzin na buty lub skarpet zgodnie z ustalonymi procedurami pobierania próbek.

2. Umieścić JEDNĄ skarpetę w sterylnej torebce i dodać 100 ml bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter.

f. Waciki do ręcznego pobierania próbek

1. Pobrać próbkę nawilżonym zestawem do pobierania wymazu zgodnie z ustalonymi procedurami pobierania

próbek.

2. Umieścić wacik w sterylnej torebce i dodać 100 ml bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter.

Inkubacja przednamnożonej próbki

1. Zwinąć torebkę, aby zminimalizować wolną przestrzeń i zapobiec kontaktowi przednamnożonej próbki z powietrzem.

Delikatnie masować torebkę przez ok. 10 ± 2 sekundy. Nie poddawać torebki obróbce w stomacherze ani

mieszalniku. Unikać tworzenia bąbelków przy mieszaniu.

2. Inkubować torebkę w warunkach tlenowych w temperaturze 41,5 ± 1°C. Właściwe czasy inkubacji podano w Tabeli 2.

OSTRZEŻENIE: Gdy bufor neutralizujący z kompleksem sulfonianu arylu ma zostać użyty jako roztwór nawilżający

gąbkę, przed rozpoczęciem badania należy przygotować roztwór rozcieńczony w stosunku 1:2 (1 część próbki

w1części jałowego bulionu wzbogacającego) przednamnożonej próbki środowiskowej, aby zmniejszyć ryzyko

związane z wynikiem fałszywie ujemnym prowadzącym do wydania zanieczyszczonego produktu. Inną możliwością

jestprzeniesienie 10 µl wzbogacającego buforu neutralizującego do probówek z roztworem lizującym 3M.

Użytkownik ma obowiązek przeprowadzić walidację alternatywnych protokołów próbkowania lub proporcji roztworów,

aby sprawdzić, czy dana metoda badawcza spełnia kryteria określone przez użytkownika.

(Polski)

PL

145

Tabela 2. Ogólne protokoły przednamnażania.

Macierz próbki Wielkość

próbki

Bulion

wzbogacający

3M Campylobacter

(ml)

(b)

Temperatura

przednamnażania

(± 1°C)

Czas

przednamnażania

(godz.)

Objętość

analizowanej

próbki (μl)

(c)

• Płukanki z tusz

(a)

• Płukanki z części

drobiowych

(a)

30 ml płukanki

w BPW

30 41,5 22–26 20

• Gąbka do

wymazów z tusz

(a)

1 gąbka

nawilżona

maksymalnie

25 ml BPW

25 41,5 22–26 20

• Mięso surowe

• Mięso gotowe

dospożycia

25 g 225 41,5 24–28 20

• Próbki z okładzin

na buty na

etapie produkcji

pierwotnej

1 zestaw do

pobierania

próbki

zokładzin

nabuty

100 41,5 22–26 20

• Waciki do ręcznego

pobierania próbek

na etapie produkcji

pierwotnej

1 nawilżony

zestaw

100 41,5 22–26 20

(a) W przypadku drobiu poddanego obróbce chlorkiem cetylopirydyniowym (CPC) konieczne jest dodanie 5 ml na litr

polisorbatu 80 (IUPAC: monooleinian polioksyetylenosorbitolu (20); CAS 9005-65-6) do przygotowanego bulionu

wzbogacającego 3M Campylobacter. Polisorbat 80 można dodać do wody przed sterylizacją bądź też dodać do

sterylnej wody przed przygotowaniem bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter.

(b) Bulion wzbogacający 3M Campylobacter należy wykorzystać w ciągu 24 godzin od przygotowania. Przed użyciem

pożywka powinna zostać doprowadzona do temperatury otoczenia (25–30°C).

(c) Przed pobraniem przednamnożonej próbki do analizy należy delikatnie masować dolną część torebki. Po pobraniu

próbki zwinąć torebkę, aby zapobiec kontaktowi przednamnożonej próbki z powietrzem. Do ponownego badania

lub kroków potwierdzających może być potrzebna dodatkowa próbka.

Specjalne instrukcje dotyczące zatwierdzonych metod

Certykat nr 111803 AOAC® Performance Tested

SM

(PTM)

W badaniach AOAC Research Institute PTM

SM

Molekularny test 3M do wykrywania 2 – Campylobacter okazał się być

skuteczną metodą wykrywania bakterii Campylobacter. W Tabeli 3 przedstawiono macierze przetestowane w ramach

tegobadania.

(Polski)

PL

146

Tabela 3. Protokoły przednamnażania zgodnie z certykatem nr 111803 AOAC PTM

SM

.

Macierz próbki Wielkość

próbki

Bulion

wzbogacający

3M Campylobacter

(ml)

(c)

Temperatura

przednamnażania

(± 1°C)

Czas

przednamnażania

(godz.)

Objętość

analizowanej

próbki (μl)

(d)

Cała tusza przemyta

400 ml BPW

(a) (b)

30 ml płukanki

w BPW

30 41,5 22–26 20

Część drobiowa

(od 1,8 do 2 kg)

przemyty 400 ml

BPW

(a) (b)

30 ml płukanki

w BPW

30 41,5 22–26 20

Gąbka do wymazów

ztusz indyczych

(a) (b)

1 gąbka

nawilżona

maksymalnie

25 ml BPW

25 41,5 24–26 20

Surowe mielone

mięsodrobiowe

(325 ± 32,5 g)

przemyte

1625 ± 32,5 ml BPW

(b)

30 ml

mieszaniny

produktu

wBPW

30 41,5 24–28 20

Panierowane kawałki

zkurczaka

25 g 225 41,5 24–28 20

(a) W przypadku drobiu poddanego obróbce chlorkiem cetylopirydyniowym (CPC) konieczne jest dodanie 5 ml na litr

polisorbatu 80 (IUPAC: monooleinian polioksyetylenosorbitolu (20); CAS 9005-65-6) do przygotowanego bulionu

wzbogacającego 3M Campylobacter. Polisorbat 80 można dodać do wody przed sterylizacją bądź też dodać do

sterylnej wody przed przygotowaniem bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter.

(b) Alternatywnie tę macierz można wzbogacać 30 ml bulionu wzbogacającego Boltona niezawierającego krwi 2X

(BF-BEB) przez 48 ± 2 godziny w temperaturze 42 ± 1,0°C w warunkach mikroaerobowych. Przenieść 20 µl próbki do

roztworu lizującego 3M.

(c) Bulion wzbogacający 3M Campylobacter należy wykorzystać w ciągu 24 godzin od przygotowania. Przed użyciem

pożywka powinna zostać doprowadzona do temperatury otoczenia (25–30°C).

(d) Przed pobraniem przednamnożonej próbki do analizy należy delikatnie masować dolną część torebki. Po pobraniu

próbki zwinąć torebkę, aby zapobiec kontaktowi przednamnożonej próbki z powietrzem. Do ponownego badania

lub kroków potwierdzających może być potrzebna dodatkowa próbka.

Przygotowanie Tacy 3M™ urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej

1. Zmoczyć szmatkę lub jednorazowy ręcznik 1-5% (obj./obj., wodnym) roztworem wybielacza do użytku domowego

iprzetrzeć nim Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.

2. Spłukać wodą Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej.

3. Osuszyć Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej za pomocą jednorazowego

ręcznika.

4. Przed rozpoczęciem użytkowania należy sprawdzić, czy Taca 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do

diagnostyki molekularnej jest sucha.

Przygotowanie Wkładki 3M™ bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej

Wkładkę 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej należy umieścić bezpośrednio na blacie laboratoryjnym:

Taca 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej nie będzie potrzebna. Stosować blok w temperaturze otoczenia

wlaboratorium (20–25°C).

Przygotowanie Wkładki 3M™ bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej

Wkładkę 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej należy umieścić w suchym podwójnym bloku grzewczym.

Włączyć suchy blok grzewczy i ustawić temperaturę pozwalającą Wkładce 3M bloku grzewczego do diagnostyki

molekularnej osiągnąć i utrzymać temperaturę 100 ± 1°C.

(Polski)

PL

147

UWAGA: W zależności od typu bloku grzewczego Wkładkę 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej należy

zostawić na około 30 minut, by osiągnęła odpowiednią temperaturę. Używając odpowiedniego, skalibrowanego

termometru (przykładowo częściowo zanurzanego termometru lub cyfrowego termometru z termoogniwem, a nie

całkowicie zanurzanego termometru) umieszczonego w wyznaczonym miejscu, sprawdzić, czy temperatura Wkładki

3Mbloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.

Przygotowanie Urządzenia 3M™ do diagnostyki molekularnej

1. Uruchomić oprogramowanie 3M™ do diagnostyki molekularnej i zalogować się. Skontaktować się z przedstawicielem

3M Food Safety, aby upewnić się, że dysponują Państwo najnowszą wersją oprogramowania.

2. Włączyć Urządzenie 3M do diagnostyki molekularnej.

3. Utworzyć lub edytować serię z danymi dla każdej próbki. Szczegółowe informacje są dostępne w instrukcji obsługi

Systemu 3M do diagnostyki molekularnej.

UWAGA: Przed włożeniem Tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej z probówkami

reakcyjnymi Urządzenie 3M do diagnostyki molekularnej musi osiągnąć stan gotowości. Etap nagrzewania trwa około

20 minut i sygnalizuje go POMARAŃCZOWA kontrolka na pasku stanu urządzenia. Kiedy urządzenie będzie gotowe do

rozpoczęcia analizy, kolor paska stanu zmieni się na ZIELONY.

Liza

Za pomocą śrubokrętu wyjąć dolną część stojaka z probówkami z roztworem lizującym 3M przed umieszczeniem go we

Wkładce 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej.

1. Umożliwić ogrzanie probówek z roztworem lizującym 3M, pozostawiając stojak w temperaturze otoczenia

(20–25°C) na noc (16–18 godzin). Alternatywą dla równoważenia temperatury probówek z roztworem lizującym

3M do temperatury otoczenia jest pozostawienie probówek z roztworem lizującym 3M na stole laboratoryjnym na

co najmniej 2 godziny, inkubacja probówek z roztworem lizującym 3M w cieplarce nastawionej na 37 ± 1°C przez

1godzinę lub umieszczenie ich w suchym podwójnym bloku grzewczym na 30 sekund w temp. 100°C.

2. Odwrócić probówki zamknięte korkiem w celu wymieszania ich zawartości. Przejść do następnego kroku w ciągu

4godzin od odwrócenia.

3. Wyjąć przednamnożoną próbkę z cieplarki.

3.1.1 Przed przeniesieniem próbki do probówki z roztworem lizującym 3M należy delikatnie masować dolną część

torebki z przednamnożoną próbką.

3.1.2 Do ponownego badania lub kroków potwierdzających może być potrzebna dodatkowa próbka. Po pobraniu

próbki zwinąć torebkę, aby zminimalizować wolną przestrzeń i zapobiec kontaktowi przednamnożonej

próbki z powietrzem. Jeśli wymagane jest potwierdzenie domniemanych wyników, należy wykonać kroki

potwierdzające niezwłocznie po otrzymaniu domniemanych wyników.

4. Dla każdej próbki oraz próbki NC (sterylnego podłoża przednamnażającego) wymagana jest jedna probówka

zroztworem lizującym 3M.

4.1 Taśmy z probówkami z roztworem lizującym 3M można dociąć do żądanej liczby probówek. Dobrać wymaganą

liczbę probówek lub taśm złożonych z 8 probówek. Umieścić probówki z roztworem lizującym 3M w pustym

stojaku.

4.2 Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami z roztworem lizującym 3M

pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.

4.3 Przednamnożoną próbkę należy przenieść do probówek z roztworem lizującym 3M w opisany poniżej sposób:

Najpierw przenieść każdą przednamnożoną próbkę do pojedynczej probówki z roztworem lizującym 3M.

Nakońcu przenieść NC.

4.4 Do zdejmowania korków taśmy z probówkami z roztworem lizującym 3M (po jednej taśmie na raz) należy

wykorzystać Narzędzie 3M™ do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej – Liza.

(Polski)

PL

148

4.5 Zdjąć korek probówki z roztworem lizującym 3M – jeśli lizat będzie zachowany do celów ponownego wykonania

testu, umieścić korki w czystym pojemniku do ponownego założenia po wykonaniu lizy.

4.5.1 Odnośnie postępowania z lizatem patrz Załącznik A.

4.6 Przenieść 20 µl próbki do probówki z roztworem lizującym 3M.

5. Kroki od 4.4 do 4.6 należy powtarzać zależnie od potrzeby dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.

20 µl

6. Po przeniesieniu wszystkich próbek przenieść 20 µl NC (jałowe podłoże przednamnażające, np. BPW) do probówki

zroztworem lizującym 3M. Nie stosować wody jako NC.

7. Upewnić się, że temperatura Wkładki 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C.

8. Umieścić odkryty stojak na probówki z roztworem lizującym 3M we Wkładce 3M bloku grzewczego do diagnostyki

molekularnej i ogrzewać przez 15 ± 1 min. Podczas ogrzewania roztwór lizujący 3M zmieni barwę z różowej (chłodny)

na żółtą (gorący).

8.1 Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie

biologiczne i NIE należy ich umieszczać w Urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej.

9. Wyjąć odkryty stojak z probówkami z roztworem lizującym 3M z bloku grzewczego 3M do diagnostyki molekularnej

i umożliwić schłodzenie we Wkładce 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut,

a maksymalnie 10 minut. Wkładka 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej, stosowana w temperaturze

otoczenia bez Tacy 3M™ bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej, powinna znajdować się bezpośrednio na stole

laboratoryjnym. Po schłodzeniu roztwór lizujący 3M ponownie przybierze różową barwę.

10. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym 3M z Wkładki 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplikacja

1. Dla każdej próbki oraz NC wymagana jest jedna probówka reagentowa Molekularnego testu 3M do

wykrywania 2 – Campylobacter.

1.1 Taśmy z probówkami można dociąć do pożądanej liczby probówek. Dobrać wymaganą liczbę pojedynczych

probówek reagentowych Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter lub taśm złożonych

z8probówek.

1.2 Probówki należy umieścić na pustym stojaku.

1.3 Nie wolno dopuścić do wstrząśnięcia granulek reagenta na dnie probówek.

2. Wybrać jedną probówkę Kontroli reagentowej 3M i umieścić ją w stojaku.

3. Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami reagentowymi Molekularnego testu

3M do wykrywania 2 – Campylobacter pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.

4. Przenieść poszczególne lizaty do probówki reagentowych Molekularnego testu 3M do wykrywania

2–Campylobacter oraz do probówki z Kontrolą reagentową 3M w sposób opisany poniżej:

Przenieść najpierw każdą próbkę lizatu do oddzielnej probówki reagentowej Molekularnego testu 3M do wykrywania

2– Campylobacter, a następnie przenieść NC. Na końcu nawodnić probówkę z Kontrolą reagentową 3M.

5. Do zdejmowania korków probówek reagentowych Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy

wykorzystać Narzędzie 3M™ do zakładania/zdejmowania korków probówek do diagnostyki molekularnej – Reagent,

po jednej taśmie na raz. Wyrzucić korek.

(Polski)

PL

149

5.1 Przenieść 20 µl próbki lizatu z górnej ½ płynu (unikać osadu) probówki z roztworem lizującym 3M do

odpowiedniej probówki reagentowej Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 –

Campylobacter

. Pipetować

pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając

roztwór pipetą 5 razy.

5.2 Powtarzać krok 5.1, aż wszystkie pojedyncze próbki lizatu zostaną dodane do odpowiednich probówek

reagentowych Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter znajdujących się w taśmie.

5.3 Probówki reagentowe Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter należy zamknąć załączonymi

dodatkowymi korkami i za pomocą zaokrąglonej strony Narzędzia 3M do zakładania/zdejmowania korków

probówek do diagnostyki molekularnej – Reagent wywołać nacisk ruchem w przód i w tył, aby upewnić się, że

korek został szczelnie nałożony.

5.4 Kroki od 5.1 do 5.3 należy powtarzać zależnie od potrzeby dla wszystkich próbek poddawanych badaniu.

5.5 Po przeniesieniu wszystkich próbek lizatu powtórzyć kroki od 5.1 do 5.3, aby przenieść 20 µl lizatu NC do

probówki reagentowej Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter.

5.6 Przenieść 20 µl lizatu NC do probówki z Kontrolą reagentową 3M. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do

wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.

6. Zamknięte korkiem probówki należy umieścić na czystej i odkażonej tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów

do diagnostyki molekularnej. Zamknąć i zablokować pokrywę tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do

diagnostyki molekularnej.

20 µL

7. W oprogramowaniu 3M do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić kongurację analizy.

8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy

wybranego urządzenia.

9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej

w Urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 60 minut, choć wyniki

dodatnie można uzyskać wcześniej.

10. Po zakończeniu testu należy wyjąć Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej

z Urządzenia 3M do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1-5% (obj./obj., wodnym)

roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowywania testów.

WAŻNA INFORMACJA: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku z

zanieczyszczeniem krzyżowym, nie należy otwierać probówek reagentowych zawierających DNA po amplikacji.

Dotyczy to probówek reagentowych Molekularnego testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter, probówek Kontroli

reagentowej 3M oraz probówek kontroli 3M macierzy. Zanieczyszczone probówki należy zawsze utylizować,

namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym) roztworze wybielacza do użytku domowego przez 1 godzinę i wynosząc poza

obszar przygotowania testów.

Wyniki i interpretacja

Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplikacji kwasu nukleinowego.

Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodatni lub

ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki dodatnie

przekazuje się w czasie rzeczywistym, natomiast wyniki ujemne i „Sprawdzić” wyświetlą się po zakończeniu testu.

Domniemane wyniki dodatnie próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi

laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą

(1,2)

, począwszy od transferu z głównego

bulionu wzbogacającego 3M Campylobacter do wybranych płytek z inkubacją bakterii Campylobacter w warunkach

mikroaerolnych, a następnie potwierdzenie izolatów za pomocą stosownych metod biochemicznych, mikroskopowych

i serologicznych. Aby przednamnażanie przebiegało jak najlepiej, po pobraniu próbki należy zwinąć torebkę do

wzbogacania.

UWAGA: Nawet próbka ujemna nie da odczytu zerowego, ponieważ system i odczynniki do amplikacji Molekularnego

testu 3M do wykrywania 2 – Campylobacter charakteryzują się swoistym poziomem tła w RLU.

(Polski)

PL

150

W rzadkich przypadkach, przy wystąpieniu nietypowego światła wychodzącego, algorytm opisze je jako „Sprawdzić”.

Firma 3M zaleca powtórzenie testów dla wszystkich próbek oznaczonych jako „Sprawdzić”. Jeżeli utrzymuje się wynik

„Sprawdzić”, należy przejść do testu potwierdzającego z zastosowaniem preferowanej metody lub zgodnie z lokalnymi

przepisami

(1,2)

.

Załącznik A. Przerwanie protokołu: Przechowywanie i ponowne badanie lizatów poddanych obróbce cieplnej

1. W celu przechowywania lizatu poddanego obróbce cieplnej należy ponownie zamknąć probówkę z roztworem

lizującym 3M czystym korkiem (patrz część Liza, punkt 4.5).

2. Przechowywać w temp. od 2 do 8°C maksymalnie przez 72 godziny.

3. Przygotować przechowywaną próbkę do amplikacji przez odwrócenie 2–3 razy w celu zmieszania.

4. Otworzyć probówki.

5. Umieścić mieszane probówki lizatu we Wkładce 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej i ogrzewać

wtemp. 100 ± 1°C przez 5 ± 1 min.

6. Wyjąć stojak z probówkami z roztworem lizującym 3M z bloku grzewczego 3M do diagnostyki molekularnej

iumożliwić schłodzenie we Wkładce 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej przez co najmniej 5 minut,

amaksymalnie 10 minut.

7. Kontynuować protokół od etapu Amplikacji wyszczególnionego powyżej.

Bibliograa:

1. Microbiology Laboratory Guidebook. U. S. Department of Agriculture (USDA) Food Safety and Inspection Service

(FSIS) Microbiology Laboratory guidebook 41.04. Isolation and identication of Campylobacter jejuni/coli/lari from

poultry rinse, sponge and raw product samples. August 1, 2016.

2. ISO 10272-1. Microbiology of the food chain - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter

spp. Part 1. Detection method.

3. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice for

Nonclinical Laboratory Studies.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus - General rules for microbiological examination.

6. 3M Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular

Detection System. Skontaktować się z przedstawicielem rmy 3M Food Safety, aby uzyskać egzemplarz tego

dokumentu.

7. ISO 11133. Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of

culture media.

8. U. S. Department of Agriculture (USDA). Food Safety and Inspection Service (FSIS) Directive 10, 250.1. Salmonella and

Campylobacter verication program for raw meat and poultry products. September 20, 2013.

Objaśnienie symboli

www.3M.com/foodsafety/symbols

(Polski)

PL

Strona jest ładowana ...

3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Instrukcja obsługi

3M Molecular Detection Assay 2 - Campylobacter MDA2CAM96, 96 tests, 1 ea Instrukcja obsługi

w innych językach

Powiązane dokumenty

Inne dokumenty