3M Allergen Protein ELISA Kit Instrukcja obsługi

Product Instructions

E96HZL

3

Hazelnut Protein ELISA Kit

Kit ELISA Protéine Noisette

Haselnuss Protein ELISA Kit

Kit ELISA per la rilevazione delle proteine di nocciola

Kit ELISA para Proteína de Avellana

Hazelnoot Proteïne ELISA test

Hazelnut Protein ELISA Kit

Hasselnød Protein ELISA Kit

Hasselnøttprotein ELISA Kit

Kit ELISA para Proteína de Avelã

Κιτ Δοκιμασίας ELISA Πρωτεΐνης Φουντουκιού

Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w

orzechach laskowych

ELISA набор (протеин фундука)

Fındık Proteini ELISA Kiti

ヘーゼルナッツプロテインELISAキット

榛子蛋白 ELISA 检测试剂盒

ชุดทดสอบ ELISA ตรวจหาโปรตีนจากถั่วเหลือง

󼪳󻱃󻹟󺗪󽴔󺞷󻄀󻺗󼕳󼞇

ELISA Kit Protein Hazelnut



EN

FR

DE

IT

ES

NL

SV

DA

NO

PT

EL

PL

RU

TR

JA

ZH

TH

KO

ID

AR

Strona jest ładowana ...

(Polski)

PL

1

Data wydania: 2017-11

Informacje o produkcie

Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach

laskowych

Test immunoenzymatyczny (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA) do analizy ilościowej białek orzecha

laskowego.

Opis i przeznaczenie produktu

3M™ Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych jest przeznaczony do wykrywania

obecności białek orzecha laskowego w wodzie pochodzącej z ostatniego etapu płukania w systemie CIP (Clean-in-

place), próbkach środowiskowych, surowcach i w żywności przetworzonej.

W 3M Zestawie ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych wykorzystywana jest metoda

Sandwich ELISA. Białka orzecha laskowego obecne w próbce reagują z przeciwciałem przeciwko orzechom laskowym

zaabsorbowanym na powierzchni studzienek do mikromiareczkowania z polistyrenu. Po usunięciu niezwiązanych białek

przez wypłukanie dodaje się przeciwciała przeciwko orzechom laskowym sprzężone z peroksydazą chrzanową (HRP).

Takie znakowane enzymem przeciwciała tworzą kompleksy z wcześniej związanym białkiem orzecha laskowego. Po

zakończeniu drugiego etapu płukania enzym wiąże się z immunosorbentem przez dodanie substratu chromogenicznego,

3,3’,5,5’-tetrametylobenzydyną (TMB). Kolor powstały w wyniku tej reakcji enzymatycznej jest bezpośrednio związany

ze stężeniem białek orzecha laskowego w badanej próbce; w związku z tym absorbancja na poziomie 450 nm stanowi

miarę stężenia białek orzecha laskowego w badanej próbce. Ilość białek orzecha laskowego w badanej próbce można

wyekstrapolować ze standardowej krzywej utworzonej ze standardów znanego stężenia i dostosowanej w sposób

uwzględniający rozcieńczenie próbki.

3M Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych jest przeznaczony do stosowania w

środowisku laboratoryjnym przez specjalistów stosownie przeszkolonych w zakresie praktyk laboratoryjnych. Firma 3M

nie udokumentowała zastosowania tego produktu w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo rma

3M nie udokumentowała zastosowania tego produktu do badania próbek leków, kosmetyków, próbek klinicznych ani

weterynaryjnych. 3M Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych nie został zwalidowany w

odniesieniu do wszystkich możliwych produktów spożywczych, procesów przetwarzania żywności i protokołów testowych.

3M Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych zawiera 96 studzienek, które opisano w

Tabeli 1.

Tabela 1. Składniki zestawu

Element Charakterystyka Sposób

przygotowania

(szczegółowe

informacje

można znaleźć

w sekcji Sposób

przygotowania

reagentów)

Przechowywanie Stabilność

3M™ Studzienki do

oznaczania białek

orzecha laskowego

metodą ELISA

Jeden woreczek foliowy

z płytką zawierającą 96

studzienek pokrytych

przeciwciałami.

Gotowe do użycia. 2–8°C w

szczelnie

zamkniętym

woreczku

foliowym

ze środkiem

pochłaniającym

wilgoć.

Ponownie uszczelnić

woreczek foliowy

zawierający

niewykorzystane

studzienki oraz środek

pochłaniający wilgoć.

Przechowywać

w temp. 2–8°C,

utrzymując stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3

(Polski)

PL

2

3M™ Koniugat

HRP do oznaczania

orzechów laskowych

(10X)

Jedna olka zawierająca 1,5

ml przeciwciał sprzężonych

z peroksydazą chrzanową

(HRP) 10X.

Przed użyciem

należy

niezwłocznie

rozcieńczyć w

stosunku 1/10,

tworząc roztwór

roboczy 1X.

2–8°C w

ciemnym

miejscu.

Koniugat 10X

zachowuje stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3M™ Standardowy

koncentrat do

oznaczania białek

orzecha laskowego

Jedna olka o znanym

stężeniu białek orzecha

laskowego.

Informacje

na temat

standardowego

sposobu

przygotowania

można znaleźć w

sekcji Procedura

ELISA.

2–8°C. Nie

zamrażać.

3M Standardowy

koncentrat do

oznaczania białek

orzecha laskowego

zachowuje stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3M™ Rozcieńczalnik

(5X)

Jedna butelka zawierająca 50

ml rozcieńczalnika 5X.

Przed użyciem

należy

niezwłocznie

rozcieńczyć w

stosunku 1/5,

tworząc roztwór

roboczy 1X.

2–8°C 3M Roztwór

rozcieńczający 5X

zachowuje stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3M™ Roztwór myjący

(20X)

Jedna butelka zawierająca 50

ml roztworu myjącego 20X.

Rozcieńczyć w

stosunku 1/20,

tworząc roztwór

roboczy 1X.

2–8°C zarówno

w przypadku

roztworu

roboczego 1X,

jak i koncentratu

roztworu

roboczego 20X.

3M Roztwór myjący

20X zachowuje

stabilność aż do

terminu ważności

zestawu. Roztwór

myjący 1X zachowuje

stabilność przez okres

co najmniej jednego

tygodnia od momentu

przygotowania.

3M™ Bufor do

ekstrakcji E26 (4X)

Jedna butelka zawierająca

120 ml buforu do ekstrakcji

4X.

Rozcieńczyć w

stosunku 1/4,

tworząc roztwór

roboczy 1X. Przed

użyciem roztwór

roboczy należy

ogrzać do temp.

50–60°C.

2–8°C zarówno

w przypadku

roztworu

roboczego

1X, jak i 3M

koncentratu

buforu do

ekstrakcji 4X.

Bufor do ekstrakcji

1X oraz 3M Bufor

rozcieńczalnika 4X

zachowują stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3M™ Roztwór

substratu

chromogenicznego

Jedna butelka

zawierająca 12 ml

3,3’,5,5’-tetrametylobenzydyny

(TMB).

Gotowe do użycia. 2–8°C w

ciemnym

miejscu.

Chronić przed

światłem. 3M

Roztwór substratu

chromogenicznego

zachowuje stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

3M™ Roztwór

zatrzymujący reakcję

Jedna butelka zawierająca 12

ml kwasu siarkowego 0,3 M.

Gotowe do użycia. 2–8°C 3M Roztwór

zatrzymujący reakcję

zachowuje stabilność

aż do terminu

ważności zestawu.

(Polski)

PL

3

Materiały niedostarczane wraz z zestawem:

• Pipety i końcówki pipet do pobierania od 10 do 100 l

• Probówki testowe

• Podkładka/aspirator do płytki do mikromiareczkowania

• Woda destylowana lub dejonizowana

• Czytnik płytek do mikromiareczkowania

• Różne rodzaje sprzętu laboratoryjnego do przygotowania roztworów reagentów i buforów

• Licznik czasu

• Wytrząsarka typu Vortex

• Kąpiel wodna w wytrząsarce lub inkubator z wytrząsarką

• Wytrząsarka orbitalna

Bezpieczeństwo

Użytkownik powinien przeczytać, zrozumieć i przestrzegać wszystkich wskazówek bezpieczeństwa dotyczących 3M

Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych. Instrukcję bezpieczeństwa należy zachować

do przyszłego wykorzystania.

OSTRZEŻENIE: Oznacza niebezpieczną sytuację, której skutkiem, wrazie braku podjęcia środków

zapobiegawczych, mogą być poważne obrażenia ciała lub śmierć i/lub uszkodzenia mienia.

WAŻNA INFORMACJA: Oznacza potencjalnie niebezpieczną sytuację, której skutkiem, wrazie niepodjęcia środków

zapobiegawczych, może być uszkodzenie mienia.

W OSTRZEŻENIE

Aby zmniejszyć ryzyko związane z ekspozycją na chemikalia:

• Produkt należy utylizować zgodnie z aktualnymi lokalnymi/krajowymi/branżowymi normami i przepisami.

• Użytkownik musi zapewnić przeszkolenie swojego personelu w zakresie odpowiednich technik przeprowadzania

testów; na przykład zasady Dobrej Praktyki Laboratoryjnej

1

lub ISO/IEC 17025

2

.

• Należy zawsze przestrzegać standardowych laboratoryjnych praktyk bezpieczeństwa, łącznie z noszeniem

odpowiedniej odzieży i okularów ochronnych przy pracy z reagentami.

• Należy unikać kontaktu skóry z 3M Roztworem zatrzymującym reakcję. Dodatkowe informacje dotyczące

bezpieczeństwa można znaleźć w karcie charakterystyki substancji.

Aby zmniejszyć ryzyko związane z występowaniem wyników fałszywie ujemnych prowadzących do dopuszczenia

do obrotu produktów skażonych:

• 3M Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych należy przechowywać w sposób

podany na opakowaniu i w informacjach o produkcie.

• 3M Zestaw ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych należy stosować w odniesieniu do

próbek żywności i próbek środowiskowych poddanych walidacji wewnętrznej lub przez niezależne organizacje.

• Należy postępować zgodnie z protokołem i wykonywać testy zgodnie z zaleceniami podanymi w Informacjach o

produkcie.

• Firma 3M nie udokumentowała zastosowania 3M Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach

laskowych w gałęziach przemysłu innych niż żywność i napoje. Przykładowo rma 3M nie udokumentowała

zastosowania tego produktu do badania próbek leków, kosmetyków, próbek klinicznych ani weterynaryjnych.

Aby zmniejszyć ryzyko związane z występowaniem niedokładnych wyników prowadzących do dopuszczenia do

obrotu produktów zanieczyszczonych:

• Należy używać tylko 3M Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych z ważnym

terminem ważności.

• Roztwory robocze należy zawsze przechowywać przy użyciu stężonych reagentów 3M Zestawu ELISA do

wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych w temperaturze 20–25°C.

• Standardowego koncentratu do oznaczania białek orzecha laskowego 3M nie należy zamrażać.

• Jeśli kolor roztworu substratu chromogenicznego zmieni się na niebieski, nie należy go używać. W celu uniknięcia

krzyżowego zanieczyszczenia 3M Roztworu substratu chromogenicznego należy przestrzegać zasad Dobrej

Praktyki Laboratoryjnej

1

.

(Polski)

PL

4

WAŻNA INFORMACJA

Aby ograniczyć ryzyko związane z niedokładnym wynikiem:

• Stabilność próbki po ekstrakcjach nie została oceniona. Bezpośrednio po dokonaniu ekstrakcji próbki należy

przeprowadzić procedurę ELISA.

• Aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu standardowe roztwory do oznaczania białek orzecha laskowego 3M

należy obsługiwać przy zastosowaniu Dobrych Praktyk Laboratoryjnych

1

.

Aby uzyskać dodatkowe informacje, należy zapoznać się z kartą charakterystyki.

W celu uzyskania informacji lub dokumentacji na temat charakterystyki produktu zapraszamy do odwiedzenia strony

www.3M.com/foodsafety lub skontaktowania się z lokalnym przedstawicielem lub dystrybutorem rmy 3M.

Obowiązki użytkownika

Użytkownicy są zobowiązani do zapoznania się z instrukcjami oraz informacjami oprodukcie. W celu uzyskania

dalszych informacji należy odwiedzić stronę internetową www.3M.com/foodsafety lub skontaktować się z lokalnym

przedstawicielem lub dystrybutorem rmy 3M.

Jak ze wszystkimi metodami testów używanymi do analizy spożywczej, matryca testowa może wpłynąć na wyniki

testu. Przy wyborze metody testowania należy pamiętać, że takie czynniki zewnętrzne, jak metody próbkowania,

protokoły testowania, przygotowanie próbki, dalsze postępowanie i technika laboratoryjna mogą wpływać na

uzyskiwane wyniki. Sama próbka spożywcza może wpłynąć na wyniki.

Użytkownik jest odpowiedzialny za wybranie takiej metody testu lub takiego produktu, by ocenić odpowiednią liczbę

próbek i tak, by wybrana metoda spełniała wymagania użytkownika.

Obowiązkiem użytkownika jest również dopilnowanie, aby zastosowane metody testowania i uzyskane wyniki spełniały

wymagania klienta i dostawcy.

Podobnie jak w przypadku każdej metody testowania, wyniki uzyskiwane za pomocą produktu rmy 3M Food Safety nie

stanowią gwarancji jakości testowanych macierzy lub procesów.

Ograniczenie gwarancji/Ograniczone środki zaradcze

JEŚLI NIE ZOSTAŁO TO WYRAŹNIE OKREŚLONE W ROZDZIALE DOT. OGRANICZONEJ GWARANCJI

POJEDYNCZYCH OPAKOWAŃ PRODUKTÓW, FIRMA 3M WYŁĄCZA ODPOWIEDZIALNOŚĆ WSZYSTKICH

GWARANCJI DOMNIEMANYCH I DOROZUMIANYCH, W TYM MIĘDZY INNYMI, DOWOLNYCH GWARANCJI

ZGODNOŚCI Z PRZEZNACZENIEM I PRZYDATNOŚCI DO OKREŚLONEGO CELU. W razie wad jakiegokolwiek produktu

rmy 3M Food Safety rma 3M lub jej autoryzowany dystrybutor wymieni taki produkt lub, wedle własnego uznania,

zwróci koszty zakupu tego produktu. Są to jedyne przysługujące środki zaradcze. W ciągu sześćdziesięciu dni od wykrycia

jakiejkolwiek podejrzewanej wady produktu należy niezwłocznie powiadomić rmę 3M oraz zwrócić produkt. W celu

uzyskania numeru autoryzowanego zwrotu towarów (RGA, ang. Returned Goods Authorization) należy skontaktować się z

działem obsługi klienta (1-800-328-1671 na terenie USA) lub z ocjalnym przedstawicielem rmy 3M Food Safety.

Ograniczenie odpowiedzialności rmy 3M

FIRMA 3M NIE BĘDZIE ODPOWIEDZIALNA ZA JAKIEKOLWIEK SZKODY ANI STRATY, ZARÓWNO BEZPOŚREDNIE,

POŚREDNIE, SZCZEGÓLNE, UBOCZNE LUB NASTĘPCZE, W TYM MIĘDZY INNYMI ZA UTRACONE ZYSKI. W

żadnym wypadku odpowiedzialność rmy 3M przyznana na mocy prawa nie może przekroczyć ceny zakupu rzekomo

wadliwego produktu.

Przechowywanie i utylizacja

Zawartość 3M Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych należy przechowywać w temp.

2–8°C. Nie zamrażać. Rozcieńczone roztwory robocze należy przechowywać w sposób opisany w Tabeli 1.

Komponentów 3M Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych nie należy używać po

upływie terminu ważności. Termin ważności i numer partii podano na zewnętrznej etykiecie pudełka.

Produkt należy utylizować zgodnie z aktualnymi lokalnymi/krajowymi/branżowymi normami i przepisami.

Instrukcja użycia

Należy dokładnie przestrzegać wszystkich instrukcji. Wprzeciwnym razie wyniki mogą być niedokładne.

Sposób przygotowania reagentów

Przed zastosowaniem należy zapewnić temperaturę pokojową (20–25°C) wszystkich reagentów. Do rozcieńczania i

przechowywania roztworów roboczych należy używać czystego sprzętu laboratoryjnego.

(Polski)

PL

5

a. 3M Bufor do ekstrakcji

W celu przygotowania buforu do ekstrakcji 1X należy dodać jedną część 3M Buforu do ekstrakcji (4X) i rozcieńczyć

ją w trzech częściach wody dejonizowanej lub destylowanej. Przed użyciem należy wstępnie ogrzać bufor do

ekstrakcji (1X) do temp. 50–60°C w kąpieli wodnej lub inkubatorze wstrząsowym. Na każdą próbkę potrzebne jest

4,5 ml buforu do ekstrakcji 1X.

b. 3M Roztwór rozcieńczający

W celu przygotowania roztworu rozcieńczającego 1X należy dodać jedną część 3M rozcieńczalnika (5X) na

cztery części wody dejonizowanej lub destylowanej. Na każdą próbkę potrzebne jest łącznie 4,5 ml roztworu

rozcieńczającego 1X.

c. 3M Roztwór myjący

W celu przygotowania roztworu myjącego 1X należy dodać jedną część 3M roztworu myjącego (20X) na 19 części

wody dejonizowanej lub destylowanej. Na każdą studzienkę 3M ELISA potrzebne jest około 2,5 ml roztworu

myjącego 1X.

Uwaga: W przypadku przechowywania 3M roztworu myjącego (20X) w temperaturze 2–8°C może dojść do

tworzenia się kryształków. W celu rozpuszczenia kryształków przed przygotowaniem roztworu myjącego (1X)

należy ogrzać 3M roztwór myjący (20X) do temp. 30–35°C w kąpieli wodnej lub inkubatorze.

d. 3M Koniugat HRP do oznaczania orzechów laskowych

W celu przygotowania koniugatu HRP do oznaczania orzechów laskowych 1X należy dodać jedną część

3M Koniugatu HRP do oznaczania orzechów laskowych (10X) i rozcieńczyć ją w 9 częściach roztworu

rozcieńczającego 1X. Przygotować bezpośrednio przed użyciem. Na każdą studzienkę 3M ELISA potrzebne jest

100 l koniugatu HRP do oznaczania orzechów laskowych 1X.

Przygotowanie próbek

Uwaga: Wszystkie próbki należy wyizolować przy użyciu buforu do ekstrakcji 1X wstępnie ogrzanego do temp. 50–60°C.

1.1 Przygotować próbkę do ekstrakcji białka w czystej probówce testowej lub jednorazowej probówce w sposób

opisany w Tabeli 2.

Tabela 2. Przygotowanie próbek

Macierz próbki Wielkość

próbki

Rozcieńczenie (1/10)

Produkty spożywcze w postaci stałej 0,5 ± 0,02 g Dodać 4,5 ± 0,09 ml wstępnie ogrzanego buforu do

ekstrakcji 1X

Produkty spożywcze w postaci ciekłej 0,5 ± 0,01 ml Dodać 4,5 ± 0,09 ml wstępnie ogrzanego buforu do

ekstrakcji 1X

Woda pochodząca z ostatniego etapu

płukania systemu Clean-in-Place (CIP)

0,5 ± 0,01 ml Dodać 4,5 ± 0,09 ml wstępnie ogrzanego buforu do

ekstrakcji 1X

(Polski)

PL

6

Produkt wpostaci stałej

Produkt wpostaci ciekłej

1.2 Inkubować rozcieńczone próbki we wstrząsowej kąpieli wodnej lub inkubatorze wstrząsowym w temp. 50–60°C

przez 25 ± 1 minut. Inny sposób polega na pozostawieniu próbek w kąpieli wodnej lub inkubatorze w temp. 50–

60°C i wstrząsaniu ręcznie przez 1 minutę co 5 minut.

1.3 Po zakończeniu inkubacji próbki należy wirować z prędkością 5000–7000 obr./min (3000 x g) przez od 20 do 30

sekund w celu wytrącenia cząsteczek lub pozostawić je do opadnięcia 5 minut w stojaku na probówki testowe.

1.4 Pobrać 100 l ze środkowej (wodnej) warstwy i dodać je do 900 l roztworu rozcieńczającego (1X). Odwirować lub

wstrząsnąć w celu dokładnego zmieszania (odpowiada to rozcieńczeniu oryginalnej próbki w stosunku 1/100).

lub

50–60°C

00:25:00

lub

3000 g / 00:00:30

00:05:00

(Polski)

PL

7

Procedura ELISA

2.1 Wyjąć jedną studzienkę ELISA 3M na próbkę i/lub standardowy roztwór i umieścić studzienki w uchwycie na

studzienki. Niewykorzystane studzienki ELISA 3M należy umieścić z powrotem w foliowym woreczku i ponownie

odłożyć w miejsce przechowywania w temp. 2–8°C.

2.2 Używając 3M standardowego koncentratu do oznaczania białek orzecha laskowego, przygotować zestaw pięciu

standardowych roztworów rozcieńczonych w roztworze rozcieńczalnika (1X).

Numer

standardowego

roztworu

Stężenie standardowego

roztworu

(ng/ml)

Objętość standardowego

roztworu dodana do

rozcieńczalnika 1X

Objętość roztworu

rozcieńczalnika 1X

5 810 10 l 3M standardowego

koncentratu do oznaczania

białek orzecha laskowego

990 l

4 270 200 l standardowego roztworu

numer 5

400 l

3 90 200 l standardowego roztworu

numer 4

400 l

2 30 200 l standardowego roztworu

numer 3

400 l

1 10 200 l standardowego roztworu

numer 2

400 l

0 0 0 400 l

2.3 Odpipetować 100 l każdego standardowego roztworu do studzienek ELISA 3M.

• Standardowy roztwór 0 (1X roztwór rozcieńczalnika)

• Standardowy roztwór 1 (10 ng/ml) ppb

• Standardowy roztwór 2 (30 ng/ml) ppb

• Standardowy roztwór 3 (90 ng/ml) ppb

• Standardowy roztwór 4 (270 ng/ml) ppb

• Standardowy roztwór 5 (810 ng/ml) ppb

2.4 Odpipetować 100 l wyekstrahowanej próbki przygotowanej w kroku 1.4 do studzienki ELISA 3M.

2.5 Inkubować studzienki ELISA 3M w wytrząsarce orbitalnej ustawionej na 400 obr./min w temp. pokojowej (20–

25°C) przez 30 ± 2 minut. Podczas tego etapu studzienki należy pozostawić przykryte, aby zapobiec odparowaniu.

2.6 Po zakończeniu inkubacji zaaspirować zawartość studzienek ELISA 3M.

2.7 Całkowicie wypełnić każdą studzienkę ELISA 3M roztworem myjącym 1X i zaaspirować go. W przypadku ręcznego

płukania należy odwrócić płytkę i przelać/wytrząsnąć zawartość do pojemnika na odpady i mocno uderzyć w

studzienki na papierze chłonnym, usuwając pozostałości roztworu myjącego. Powtórzyć ten etap trzykrotnie dla

wszystkich czterech płukań.

2.8 Odpipetować 100 l koniugatu 1X HRP do oznaczania orzechów laskowych do każdej studzienki ELISA 3M.

Inkubować w wytrząsarce orbitalnej ustawionej na 400 obr./min w temp. pokojowej przez 10 ± 2 minut. Podczas

tego etapu płytka powinna być przykryta (brak dostępu światła) i wypoziomowana.

2.9 Powtórzyć kroki 2.6 i 2.7, przeprowadzając wszystkie cztery płukania przy użyciu roztworu myjącego (1X).

2.10 Odpipetować 100 l 3M Roztworu substratu chromogenicznego (TMB) do każdej studzienki ELISA 3M.

2.11 Inkubować w wytrząsarce orbitalnej ustawionej na 400 obr./min w temp. pokojowej przez 10 minut. Podczas tego

etapu płytka powinna być przykryta (brak dostępu światła) i wypoziomowana.

2.12 Po zakończeniu inkubacji dodać 100 l 3M Roztworu zatrzymującego reakcję do każdej studzienki ELISA 3M i

określić absorbancję (przy wartości 450nm) w ciągu 30 minut.

(Polski)

PL

8

00:30:00/temperatura pokojowa

00:10:00/temperatura pokojowa

Analiza wyniku

3.1 Odjąć średnią wartość zakłóceń dla każdej próbki (średni odczyt absorbancji próbki minus średni odczyt

absorbancji wzorca zerowego).

3.2 Za pomocą oprogramowania komputerowego umożliwiającego wygenerowanie dopasowania krzywej logistycznej

czterech parametrów należy stworzyć krzywą roztworu standardowego przez przedstawienie stężenia w ng/

ml (ppb) na osi x, a odczytu absorbancji dla każdego odpowiedniego roztworu standardowego na osi y. Można

również wykorzystać wielomian drugiego stopnia (kwadratowy) lub inne dopasowania krzywej; będą one jednak

stanowić mniej precyzyjne dopasowanie danych.

(Polski)

PL

9

3.3 Obliczyć stężenia próbki krzywej roztworu standardowego; jednostka wyniku to ng/ml (ppb). Następnie

należy pomnożyć wynik przez współczynnik rozcieńczenia próbki w celu uzyskania stężenia oryginalnej

próbki. Przykładowo: jeśli całkowite rozcieńczenie próbki wynosi 1/100, a stężenie próbki krzywej roztworu

standardowego wynosi 200 ng/ml (ppb), ostateczne stężenie próbki wynosi 200 ng/ml x 100 = 20000 ng/ml

(ppb), czyli 20 g/ml (ppm).

Minimalne parametry użytkowe

a. Analityczna granica detekcji (LOD) wynosi 1,9 ng/ml (ppb).

Granicę detekcji określa się jako najniższe stężenie alergenu w próbce testowej, jakie można odróżnić od próbki

rzeczywiście zerowej z konkretnym poziomem prawdopodobieństwa

3

. Określa się ją przez dodanie trzech odchyleń

roztworu standardowego do średniej wartości gęstości optycznej trzydziestu sześciu kopii wzorca zerowego i

obliczenie odpowiedniego stężenia.

b. Granica kwantykacji (LOQ) wynosi 1 ppm.

Granicę kwantykacji określa się jako najniższe stężenie alergenu w próbce testowej, jakie można wyodrębnić w

granicach rozsądku z konkretnym poziomem dokładności

3

.

Dokładność

Dokładność wewnątrztestowa Średnia %CV = <10 N=12

Dokładność międzytestowa Średnia %CV = <10 N=12

Swoistość i reaktywność krzyżowa

Test ten rozpoznaje białka orzecha laskowego i został przebadany przy użyciu wielu próbek pod względem

reaktywności krzyżowej (Tabela 3).

Tabela 3. Reaktywność krzyżowa 3M Zestawu ELISA do wykrywania białek obecnych w orzechach laskowych.

Próbka macierzy % reaktywności krzyżowej

Mąka migdałowa <1%

Mleko migdałowe <1%

BLG <1%

Orzech brazylijski <1%

Mąka gryczana <1%

Kazeina wołowa <1%

Mleko krowie <1%

Orzech nerkowca <1%

Seler <1%

Ciecierzyca <1%

Mąka kokosowa <1%

Mleko kokosowe <1%

Mąka kukurydziana <1%

Parwalbumina ryby <1%

Orzech laskowy (+)

Fasola limeńska <1%

Orzech makadamia <1%

Nasiona gorczycy <1%

Owomucyna <1%

Ekstrakt grochowy <1%

Mąka z orzechów

arachidowych

<1%

Orzech pekan <1%

Strona jest ładowana ...

3M Allergen Protein ELISA Kit Instrukcja obsługi

3M Allergen Protein ELISA Kit Instrukcja obsługi

w innych językach

Powiązane dokumenty

Inne dokumenty