PRAXISDIENST 491005 Instrukcja obsługi

Marka: PRAXISDIENST

Model: 491005

Typ: Instrukcja obsługi

nal von minden GmbH

Carl

Zeiss

Strasse 12

47445 Moers

Germany

Moers

Tel: +49 (2841) 99820-0

Fax: +49 (2841) 99820-1

Directors:

Commercial reg. Kleve

Regensburg

Tel: +49 941 29010-0

Fax: +49 941 29010-50

www.nal-vonminden.com

info@nal-vonminden.com

Sandra von Minden

Roland Meißner

Thomas Zander

HRB 5679

Steuer-Nr. 244/133/00130

UST-ID-Nr. DE 189 016 086

Version

1.4, 2017-05-31

NADAL® RSV Test

(test cassette)

REF 491005

Gebrauchsanweisung 2

Instructions for use 5

Instructions d’utilisation 8

Instrucciones de uso 11

Sposób użycia 14

Instruções de Utilização 17

Symbols 23

Our Teams 24

DEUTSCH NADAL® RSV Test (Ref. 491005)

nal von minden GmbH • Carl-Zeiss-Strasse 12 • 47445 Moers • Germany • [email protected] • www.nal-vonminden.com 2

1. Verwendungszweck und Anwendungsbereich

Der NADAL® RSV Test ist ein chromatographischer

Immunoassay im Lateral-Flow Format zum qualitativen,

Nachweis von Respiratorisches-Synzytial-Virus (RSV) in

nasopharyngealen Aspiraten und Abstrichen. Der Test ist als

Hilfsmittel bei der Diagnose einer durch RSV verursachten

Atemwegsinfektion bestimmt und nur für den professionellen

Gebrauch ausgelegt.

2. Einleitung und Diagnostische Bedeutung

RSV ist das häufigste Atemwegsvirus bei Säuglingen und

Kleinkindern. Es infiziert praktisch alle Kinder bis zum Alter

von zwei Jahren. Bei den meisten Kindern verursacht das Virus

Symptome, die denen der gewöhnlichen Erkältung ähneln. Bei

Säuglingen, die zu früh und/oder mit einer chronischen

Lungenerkrankung geboren wurden, kann RSV eine schwere

oder sogar lebensbedrohliche Krankheit verursachen. Vor der

Einführung von Synagis® führten RSV-Erkrankungen jährlich zu

mehr als 125.000 Krankenhauseinweisungen. Es bestand bei

etwa 2% von Neugeborenen ein hohes Sterberisiko. Die

Symptome schließen Fieber, Schnupfen und weitere schwere

Symptome wie Husten, schwere und schnelle Atmung, sowie

Keuchen ein.

3. Testprinzip

Der NADAL® RSV Test ist ein chromatographischer

Immunoassay im Lateral-Flow Format zum qualitativen,

Nachweis von RSV (Respiratorisches-Synzytial-Virus) in

nasopharyngealen Aspiraten und Abstrichen.

Eine Kombination aus monoklonalen Antikörper-Farbstoff-

Konjugaten und polyklonalen Festphasenantikörpern wird im

NADAL® RSV Test verwendet, um RSV selektiv und mit einem

hohen Grad an Sensitivität und Spezifität nachzuweisen.

Nach der Entnahme und Aufbereitung einer Probe werden

einige Tropfen davon in die Probenvertiefung () der

Testkassette gegeben.

Während die Probe die Membran entlang wandert, binden die

Antikörper-Farbstoff-Konjugate an RSV-Antigene (wenn sie in

der Probe vorhanden sind), dabei werden Antikörper-Antigen-

Komplexe gebildet. Im Falle eines positiven Ergebnisses,

binden diese Komplexe an polyklonale Antikörper im

Testlinienbereich der Testkassette und rufen eine rosa Linie

hervor. In Abwesenheit von RSV, erscheint keine Linie im

Testlinienbereichen der Testkassette. Das Reaktionsgemisch

wandert nun weiter die Membran der Testkassette entlang.

Ungebundene Konjugate binden die Reagenzien im Kontroll-

linienbereich, dabei entsteht eine rosa Linie, die darauf

hinweist, dass genügend Probenvolumen hinzugegeben wurde

und dass die Membran ausreichend durchnässt ist.

4. Bestandteile der Testpackung

•20 NADAL® RSV Testkassetten

•20 Einwegpipetten

•20 Tupfer

•2 Pufferfläschchen „Buffer“ (11 ml)

•1 Gebrauchsanweisung

5. Zusätzlich benötigte Materialien

•Timer

•Röhrchen aus Kunststoff (für min. 1 ml Puffer)

•0,5 ml-Pipette

•ggf. 1 ml-Pipette

•Geeignetes Verdünnungsmedium (z. B. sterile Kochsalz-

lösung, für Aspirate)

•Katheter oder Schleimfalle (für Aspirate)

6. Haltbarkeit und Lagerung der Reagenzien

NADAL® RSV Test-Kits sollten bei 4-30°C gelagert und bis zum

auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum verwendet

werden. Frieren Sie die Test-Kits nicht ein. Verwenden Sie die

Tests nicht nach dem Verfallsdatum.

7. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen

•Nur für den professionellen in-vitro-diagnostischen

Gebrauch.

•Lesen Sie die komplette Gebrauchsanweisung vor der Test-

durchführung sorgfältig durch.

•Den Test nicht nach dem auf der Verpackung angegebenen

Verfallsdatum verwenden.

•Test nicht verwenden, wenn der Folienbeutel beschädigt ist.

•Tests nicht wiederverwenden.

•Geben Sie Proben nicht in das Reaktionsfeld (Ergebnisfeld).

•Das Reaktionsfeld (Ergebnisfeld) und den Eintauchbereich

nicht berühren, um Kontaminierung zu vermeiden.

•Zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen sollte für jede

Probe ein eigenes Extraktionsröhrchen verwendet werden.

•Keine Bestandteile aus unterschiedlichen Test-Kits aus-

tauschen oder mischen.

•Reinigen Sie Verschüttetes mit einem geeigneten

Desinfektionsmittel.

•Essen, trinken oder rauchen Sie nicht in dem Bereich, in

dem mit Proben und Test-Kits umgegangen wird.

•Tragen Sie beim Umgang mit Proben Schutzkleidung wie

Laborkittel, Einmalhandschuhe und Schutzbrille.

•Behandeln Sie alle Proben so, als ob sie infektiöse

Reagenzien enthielten. Beachten Sie bestehende Vorsichts-

maßnahmen für mikrobiologische Risiken während aller

Verfahren sowie Standardrichtlinien für die korrekte

Probenentsorgung.

•Dieser Test enthält Erzeugnisse tierischen Ursprungs.

Zertifizierte Kenntnisse der Herkunft und/oder des

Sanitärzustands der Tiere gewährleisten nicht völlig die

Abwesenheit übertragbarer Pathogene. Es wird daher

empfohlen, diese Produkte als potentiell infektiös zu

betrachten und sie gemäß den üblichen Sicherheits-

vorkehrungen zu behandeln (z.B. Verschlucken oder Ein-

atmen vermeiden).

•Feuchtigkeit und Temperaturen können Testergebnisse

beeinträchtigen.

•Benutzte Testmaterialien sollten gemäß lokalen Vorgaben

entsorgt werden.

8. Probennahme, -vorbereitung und -lagerung

Hinweise:

•RSV-Proben sollten fast ausschließlich aus den Atemwegen

gewonnen werden.

•Verwenden Sie eine Schleimfalle oder einen Katheter, um

nasopharyngeale Aspirate zu entnehmen.

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•Nasopharyngeale Abstriche können mit diesem Test

verwendet werden. Sie sind jedoch von etwas minderer

Qualität als nasopharyngeale Aspirate.

•Wenn ein Abstrichtupfer nicht unverzüglich getestet wird,

sollte er bei 2-8°C in einem sauberen und trockenen

Behälter (nicht im Lieferumfang enthalten) aufbewahrt

werden und in den nächsten 24 Stunden getestet werden.

•Verwenden Sie kein Aufbewahrungs-Medium.

Nasopharyngeale Aspirate

1. Nach der Probenentnahme unter Verwendung eines

geeigneten Verfahrens, verdünnen Sie das nasopharyn-

geale Aspirat mit einem geeigneten Medium (z. B. steriler

Kochsalzlösung) bis zu einem maximalen Volumen von

3 ml.

2. Geben Sie 1 ml verdünnter Probe (oder 2 x 0,5 ml) in ein

Röhrchen aus Kunststoff und zentrifugieren Sie 10 Minuten

lang bei 3.500 rpm.

3. Verwerfen Sie den Überstand und resuspendieren Sie das

Pellet in 0,5 ml Puffer „Buffer“. Mit Hilfe der Pipette

mischen Sie die Suspension gründlich durch mehrmaliges

auf- und abpipettieren.

4. Lassen Sie die Extraktionslösung 15 Minuten lang vor der

Testdurchführung stehen.

Nasopharyngeale Abstriche

1. Entnehmen Sie einen nasopharyngealen Abstrich mit

einem mitgelieferten Tupfer oder sterilen Tupfer mit

Rayon- oder Dacronspitze. (Hinweis: Verwenden Sie keine

Tupfer mit Spitzen aus Baumwolle oder Calciumalginat,

Holzschäften oder die, die mit Aktivkohle oder agar- sowie

gelatinehaltigem Transportmedien imprägniert sind).

2. Unmittelbar nach der Entnahme führen Sie den Tupfer in

ein Röhrchen aus Kunststoff, dem 1 ml Puffer „Buffer“

(oder 2 x 0,5 ml) zugegeben wurde, und drehen Sie den

Tupfer kräftig 10 Sekunden lang, um eine angemessene

Extraktion zu gewährleisten.

3. Lassen Sie die Extraktionslösung 15 Minuten lang stehen.

4. Am Ende der Extraktionszeit drücken Sie die Flüssigkeit

gründlich aus dem Tupfer, indem Sie ihn gegen die Wand

des Röhrchens ausdrücken.

5. Entsorgen Sie den Tupfer in Übereinstimmung mit

Standardrichtlinien für angemessene Entsorgung infek-

tiöser Materialien.

9. Testdurchführung

Bringen Sie alle Tests, Proben, Puffer und/oder Kontrollen

vor der Testdurchführung auf Raumtemperatur (15-30°C).

1. Entnehmen Sie die Testkassette dem verschlossenen

Folienbeutel und verwenden Sie sie baldmöglichst.

2. Halten Sie die Pipette senkrecht

und geben Sie 6 Tropfen (200 µL)

der Probe in die Probenvertiefung

().

3. Starten Sie den Timer.

4. Werten Sie das Testergebnis

genau 10 Minuten nach der

Zugabe der extrahierten Lösung in

die Probenvertiefung aus.

10. Testauswertung

Positiv

Es erscheinen zwei farbige Linien. Eine

farbige Linie erscheint im Kontrolllinien-

bereich (C), die andere farbige Linie

erscheint im Testlinienbereich (T).

Negativ

Es erscheint eine farbige Linie im

Kontrolllinienbereich (C). Im Testlinien-

bereich (T) erscheint keine farbige Linie.

Ungültig

Die Kontrolllinie (C) erscheint nicht.

Ergebnisse von den Tests, die nach der

festgelegten Auswertezeit keine Kon-

trolllinie gebildet haben, müssen ver-

worfen werden.

Überprüfen Sie den Verfahrensablauf und wiederholen Sie die

Testung mit einer neuen Testkassette. Falls das Problem

weiterbesteht, verwenden Sie das Test-Kit bitte nicht weiter

und setzen Sie sich mit ihrem Distributor in Verbindung.

Ungenügendes Probenvolumen, abgelaufene Tests oder

fehlerhafte Vorgehensweise sind die wahrscheinlichsten

Ursachen dafür, dass die Kontrolllinie nicht erscheint.

11. Qualitätskontrolle

Die Testkassette beinhaltet eine interne Verfahrenskontrolle:

Eine im Kontrolllinienbereich (C) erscheinende farbige Linie

wird als interne Verfahrenskontrolle betrachtet. Sie bestätigt

ausreichendes Probenvolumen, eine korrekte Verfahrens-

technik und dass die Membran ausreichend durchnässt ist.

Die Gute Laborpraxis (GLP) empfiehlt den Einsatz von Kontroll-

materialien zum Nachweis der einwandfreien Leistung des

Testkits.

12. Grenzen des Tests

•Der NADAL® RSV Test ist speziell für den qualitativen

Nachweis von RSV in nasopharyngealen Aspiraten und

Abstrichen ausgelegt.

•Wie bei allen diagnostischen Verfahren sollte der Arzt die

mit dem NADAL® RSV Test erhaltenen Daten im

Zusammenhang mit anderen, klinischen Methoden

evaluieren.

13. Leistungsmerkmale des Tests

Genauigkeit

Eine Studie wurde mit 49 positiven, nasopharyngealen

Aspiraten von Kindern mit RSV-Typ-Bronchiolitis (RSV A, RSV B

oder nicht-identifizierten RSV) und mit 47 anderen, virenfreien

nasopharyngealen Aspiraten durchgeführt.

Die mit dem NADAL® RSV Test erhaltenen Ergebnisse wurden

mit Immunfluoreszenzergebnissen des IMAGEN VRS-Kit

(DAKO) verglichen.

RSV-positive und RSV-negative klinische Proben wurden mit

dem NADAL® RSV Test getestet und mit Immunfluoreszenz

und Kulturmethoden bestätigt.

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Immunfluores

zenzmethode

Positiv Negativ Total

NADAL® RSV

Test

Positiv 42 3 45

Negativ 7 44 51

Total 49 47 96

Relative Sensitivität: 86% (42/49)

Relative Spezifität: 94% (44/47)

Gesamtübereinstimmung: 90% (86/96)

Eine Probe, die in der obigen Tabelle nicht enthalten ist,

wurde mit der Immunofluoreszenzmethode untersucht und

für negativ befunden und mit dem NADAL® RSV Test

untersucht und für positiv befunden. Sie wurde als positive

Probe mit der PCR-Methode bestätigt.

Kreuzreaktivität

Nasopharyngeale Aspirate, die auf Parainfluenzavirus (2

Proben), Rhinovirus (7 Proben) oder Adenovirus (2 Proben)

positiv waren, wurden mit dem NADAL® RSV Test getestet und

zeigten wiederholt negative Ergebnisse, während die

Anwesenheit der oben genannten Viren in den Proben

entweder durch die Zellkultur oder die Immunofluoreszenz-

methode bestätigt wurde.

14. Referenzen

1. Chanock, R.M., and L. Findberg. 1957. Recovery from infants with respiratory illness

of a virus related to chimpanzee coryza agent (CCA). II. Epidemiologic aspects of

infection in infants and young children. Am. J. Hyg.66 : 291-300.

2. Chanock, R.M., H.W. Kim, A.J. Vargosko, A. Deleva, K.M. Johnson, C.Cumming, and

R.H. Parrott. 1961. Respiratory syncytial virus. I. Virus recovery and other

observations during 1960 outbreak of bronchiolitis, pneumonia, and minor

respiratory diseases in children. J. Am. Med. Assoc. 176 : 647-653.

3. Hall, C.B, R.G. Douglas, and J.M. Geiman. 1976. Respiratory syncytial virus

infections in infants: quantitation and duration of shedding. J. Pediatr. 89 : 1443-

1447.

4. Hall, C,B,J.T. McBride, E.E. Walsh, D.M. Bell, C.L. Gala, S.Hildreth, L.G. Teneyck, and

WW.J. Hall. 1983. Aerosolized ribavirin treatment of infants with respiratory

syncytial virus infection. N.Engl. J. Med. 308 : 1443-1447.

5. Taber, L.H.V, Knight, B.E. Gilbert, H.W. McClung, S.Z. Wilson, H.J. Norton, J.M.

Thurson, W.H. Gordon, R.L. Atmar and W.R. Schlaudt. 1983. Ribavirin aerosol

treatment of bronchiolitis associated with respiratory syncytial virus infection in

infants. Pediatrics 72 : 613-618.

6. Ahluwalia, G.J. Embree, P. McNicol, B.Law, and G.W. Hammond. 1987. Comparison

of nasopharyngeal aspirate and nasopharyngeal swab specimens for respiratory

syncytial virus diagnosis by cell culture, indirect immunofluorescence assay, and

enzyme-linked immunoabsorbent assay. J.Clin. Microbiol. 257 : 763-767.

Rev. 4, 2017-05-31 OM/UJa

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1. Intended Use

The NADAL® RSV Test is a lateral flow chromatographic

immunoassay for the qualitative detection of respiratory

syncytial virus (RSV) in nasopharyngeal aspirates and swabs.

This test is intended for use as an aid in the diagnosis of

respiratory tract infections caused by RSV and is designed for

professional use only.

2. Introduction and Clinical Significance

RSV is the most common respiratory virus in infants and young

children. It infects virtually all children by the age of two. In

most children, the virus causes symptoms resembling those of

the common cold. In infants born prematurely and/or with

chronic lung disease, RSV can cause a severe or even life-

threatening disease. Prior to the introduction of Synagis®, RSV

disease resulted annually in over 125,000 hospitalisations.

There was a high mortality risk amongst approximately 2% of

infants. Symptoms of RSV can include fever, runny nose and

other more serious symptoms like coughing, difficult and rapid

breathing or wheezing.

3. Test Principle

The NADAL® RSV Test is a lateral flow chromatographic

immunoassay for the qualitative detection of RSV (respiratory

syncytial virus) in nasopharyngeal aspirates and swabs.

A combination of monoclonal antibody-dye conjugates and

polyclonal solid phase antibodies is used in the NADAL® RSV

Test to selectively detect RSV with a high degree of sensitivity

and specificity.

After collection and treatment of a sample, a few drops of it

are added to the sample well () of the test cassette.

As the sample migrates along the membrane, antibody-dye

conjugates bind to RSV antigens (if they are present in the

sample), forming antibody-antigen complexes. In the case of a

positive result, these complexes bind to polyclonal antibodies

in the test line region of the test cassette and produce a pink-

rose line. In the absence of RSV, no line appears in the test line

region of the test cassette. The reaction mixture continues

migrating along the membrane of the test cassette. Unbound

conjugates bind to the reagents in the control line region,

producing a pink-rose line, which demonstrates that the

proper volume of specimen has been added and membrane

wicking has occurred.

4. Reagents and Materials Supplied

•20 NADAL® RSV test cassettes

•20 disposable pipettes

•20 swabs

•2 bottles of Buffer (11 ml)

•1 package insert

5. Additional Materials Required

•Timer

•Plastic tube (for min. 1 ml buffer)

•0,5 ml-pipettes

•1 ml-pipettes (if necessary)

•Appropriate dilution medium (e.g. sterile saline, for

aspirates)

•Catheter or mucus trap (for aspirates)

6. Storage & Stability

NADAL® RSV test kits should be stored at 4-30°C and used by

the expiry date indicated on the package. Do not freeze test

kits. Do not use tests beyond the expiry date.

7. Warnings and Precautions

•For professional in-vitro diagnostic use only.

•Carefully read through the test procedure prior to testing.

•Do not use the test beyond the expiration date indicated on

the package.

•Do not use the test if the foil pouch is damaged.

•Do not reuse tests.

•Do not add samples to the reaction area (result area).

•In order to avoid contamination, do not touch the reaction

area (result area) or the immersion area.

•Avoid cross-contamination of specimens by using a new

extraction tube for each specimen obtained.

•Do not substitute or mix components from different test

kits.

•Clean up spillage thoroughly, using an appropriate

disinfectant.

•Do not eat, drink or smoke in the area where specimens

and test kits are handled.

•Wear protective clothing such as laboratory coats,

disposable gloves and eye protection when specimens are

being assayed.

•Handle all specimens as if they contain infectious agents.

Observe established precautions for microbiological risks

throughout all procedures and standard guidelines for the

appropriate disposal of specimens.

•The test kit contains products of animal origin. Certified

knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals

does not completely guarantee the absence of transmissible

pathogenic agents. It is therefore recommended that these

products be treated as potentially infectious, and handled

in accordance with usual safety precautions (e.g., do not

ingest or inhale).

•Humidity and temperature can adversely affect test results.

•Used testing materials should be discarded according to

local regulations.

8. Specimen Collection and Preparation

Notes:

•RSV samples should be taken almost exclusively from the

respiratory tract.

•Use a mucus trap or a catheter to collect nasopharyngeal

aspirate sample.

•Nasopharyngeal swabs may also be used with this test.

However, they are somewhat inferior to nasopharyngeal

aspirate samples.

•If a swab is not tested immediately, it should be stored in a

clean and dry container (not supplied) at 2-8°C and tested

within the next 24 hours.

•Do not use any holding medium.

Nasopharyngeal aspirate

1. After sample collection using a suitable procedure, dilute

the nasopharyngeal aspirate with appropriate medium (e.g.

sterile saline) up to a maximum volume of 3 ml.

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2. Add 1 ml of the diluted sample (or 2 x 0.5 ml) to a plastic

tube and centrifuge for 10 minutes at 3,500 rpm.

3. Discard the supernatant and resuspend the pellet in 0.5 ml

of buffer. Using the pipette, mix the suspension well by

repeated up and down pipetting.

4. Allow the extraction solution to stand for 15 minutes

before performing the test.

Nasopharyngeal swab

1. Collect a nasopharyngeal swab sample, using provided

swabs or sterile swabs with rayon or dacron tips. (Note: Do

not use swabs with cotton or calcium alginate tips, wooden

shafts or impregnated with charcoal or transport media

containing agar or gelatin).

2. Immediately after collection, immerse the swab into a

plastic tube with added 1 ml of Buffer (or 2 x 0.5 ml) and

swirl the swab vigorously for 10 seconds to ensure

adequate extraction.

3. Allow the extraction solution to stand for 15 minutes.

4. At the end of the extraction time, squeeze the liquid from

the swab thoroughly by pressing it against the tube wall.

5. Discard the swab in accordance with standard guidelines

for the appropriate disposal of infectious materials.

9. Test Procedure

Bring tests, specimens, buffer and/or controls to room

temperature (15-30°C) prior to testing.

1. Remove the test cassette from the

sealed foil pouch and use it as

soon as possible.

2. Holding the pipette vertically,

dispense 6 drops (200 µL) of the

extracted solution into the sample

well ().

3. Start the timer.

4. Read the test result exactly 10

minutes after adding the extracted

solution to the sample well.

10. Result Interpretation

Positive

Two coloured lines appear. One

coloured line appears in the control

line region (C) and the other coloured

line appears in the test line region (T).

Negative

Only one coloured line appears in the

control line region (C). No coloured

line appears in the test line region (T).

Invalid

The control line fails to appear.

Results from any test which has not

produced a control line at the

specified reading time must be

discarded. Please review the

procedure and repeat the test with a

new test cassette.

If the problem persists, discontinue using the test kit

immediately and contact your local distributor.

Insufficient specimen volume, incorrect operating procedure

or expired tests are the most likely reasons for the control line

failure.

11. Quality Control

An internal procedural control is included in the test strip:

A coloured line appearing in the control line region (C) is

considered an internal procedural control. It confirms

sufficient specimen volume, adequate membrane wicking and

correct procedural technique.

Good laboratory practice (GLP) recommends the use of

control materials to ensure proper test kit performance.

12. Limitations

•The NADAL® RSV Test is specifically designed for the

qualitative detection of RSV in nasopharyngeal aspirates

and swabs.

•As with any diagnostic procedure, the physician should

evaluate data obtained with the NADAL® RSV Test in

conjunction with other clinical methods.

13. Performance Characteristics

Accuracy

A study was performed on 49 positive, nasopharyngeal

aspirate samples obtained from children suffering from RSV

type bronchiolitis (RSV A, RSV B or non-identified RSV) and on

other 47 nasopharyngeal aspirates free of virus.

The results obtained with the NADAL® RSV Test were

compared with immunofluorescence results obtained using

the IMAGEN RSV kit (DAKO).

RSV-positive and RSV-negative clinical samples were tested

using the NADAL® RSV Test and confirmed with

immunofluorescence and a culture method.

Immunofluorescence method

Positive Negative Total

NADAL® RSV

Test

Positive 42 3 45

Negative 7 44 51

Total 49 47 96

Relative sensitivity: 86% (42/49)

Relative specificity: 94% (44/47)

Overall agreement: 90% (86/96)

One sample, not included in the table above, was found

negative by immunofluorescence method and found positive

using the NADAL® RSV Test. It was confirmed as a positive

sample by PCR method.

Cross-reactivity

Nasopharyngeal aspirates positive for parainfluenza virus (2

samples), rhinovirus (7 samples) or adenovirus (2 samples)

were tested, using the NADAL® RSV Test and repeatedly

showed negative results, while the presence of the

aforementioned viruses in the samples was confirmed either

by cell culture or immunofluorescence methods.

14. References

1. Chanock, R.M., and L. Findberg. 1957. Recovery from infants with respiratory illness

of a virus related to chimpanzee coryza agent (CCA). II. Epidemiologic aspects of

infection in infants and young children. Am. J. Hyg.66 : 291-300.

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2. Chanock, R.M., H.W. Kim, A.J. Vargosko, A. Deleva, K.M. Johnson, C.Cumming, and

R.H. Parrott. 1961. Respiratory syncytial virus. I. Virus recovery and other

observations during 1960 outbreak of bronchiolitis, pneumonia, and minor

respiratory diseases in children. J. Am. Med. Assoc. 176 : 647-653.

3. Hall, C.B, R.G. Douglas, and J.M. Geiman. 1976. Respiratory syncytial virus

infections in infants: quantitation and duration of shedding. J. Pediatr. 89 : 1443-

1447.

4. Hall, C,B,J.T. McBride, E.E. Walsh, D.M. Bell, C.L. Gala, S.Hildreth, L.G. Teneyck, and

WW.J. Hall. 1983. Aerosolized ribavirin treatment of infants with respiratory

syncytial virus infection. N.Engl. J. Med. 308 : 1443-1447.

5. Taber, L.H.V, Knight, B.E. Gilbert, H.W. McClung, S.Z. Wilson, H.J. Norton, J.M.

Thurson, W.H. Gordon, R.L. Atmar and W.R. Schlaudt. 1983. Ribavirin aerosol

treatment of bronchiolitis associated with respiratory syncytial virus infection in

infants. Pediatrics 72 : 613-618.

6. Ahluwalia, G.J. Embree, P. McNicol, B.Law, and G.W. Hammond. 1987. Comparison

of nasopharyngeal aspirate and nasopharyngeal swab specimens for respiratory

syncytial virus diagnosis by cell culture, indirect immunofluorescence assay, and

enzyme-linked immunoabsorbent assay. J.Clin. Microbiol. 257 : 763-767.

Rev. 4, 2017-05-31 OM/UJa

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1. Domaine d'application

Le test NADAL® RSV est un immunodosage chromato-

graphique à flux latéral pour la détection qualitative du Virus

Respiratoire Syncytal (en anglais: Respiratory syncytial Virus -

RSV) dans les prélèvements d’écouvillonnage et d’aspiration

rhino-pharyngé(e). Le test est une aide au diagnostic des

infections des voies respiratoires dues à RSV. Il est réservé à

un usage professionnel.

2. Introduction et signification clinique

RSV est le virus responsable du plus grand nombre d’infections

chez les nourrissons et les jeunes enfants. Les jeunes enfants

âgés de 0 à 2 ans sont fortement touchés par cette infection.

Les symptômes sont semblables à ceux d'un rhume. Chez les

nourrissons nés ou touchés avec/par une infection pulmonaire

chronique, RSV est une maladie grave voire mortelle. Avant

l'introduction du Synagis®, le RSV entraînait l'hospitalisation

de plus de 125 000 enfants par an, dont un risque de décès de

2% chez les nourrissons. Les symptômes du RSV sont dans un

premier temps semblables à ceux du rhume comme la fièvre.

La toux, les difficultés respiratoires et l'asthme sont d'autres

symptômes fréquents.

3. Principe du test

Le test NADAL® RSV est un immunodosage chromato-

graphique à flux latéral pour la détection qualitative du Virus

Respiratoire Syncytal (en anglais: Respiratory syncytial Virus -

RSV) dans les prélèvements d’écouvillonnage et d’aspiration

rhino-pharyngé(e).

La méthode emploie la combinaison unique d'un conjugué

d'anticorps monoclonaux marqués à l'or colloïdal et

d'anticorps polyclonaux en phase solide pour l'identification

sélective du RSV à un degré élevé de sensibilité et de

spécificité.

L'échantillon est recueilli, préparé puis déposé dans le puits

dépôt de la cassette. ()

Lors de la migration de l'échantillon le long de la membrane, le

conjugué anticorps-or colloïdal se lie à l'antigène RSV (si

présent dans l'échantillon) générant un complexe anticorps-

antigènes. Dans le cas d'un résultat positif, ce complexe se lie

à l'anticorps polyclonal au niveau de la zone de test produisant

ainsi l'apparition d'une ligne rose. En l'absence de RSV, aucune

ligne n'apparaît au niveau de la zone de test de la cassette. Le

mélange réactif continue de migrer le long de la membrane de

la cassette. Le conjugué libre se lie au réactif dans la zone de

contrôle. Une ligne de contrôle rose apparaît. Cette ligne

confirme que le volume d'échantillon était suffisant et que la

membrane a été suffisamment imbibée.

4. Réactifs et matériel fournis

•20 cassettes NADAL® RSV

•20 pipettes à usage unique

•20 écouvillons

•2 flacons de solution tampon "Buffer" (11 ml)

•1 notice d'utilisation

5. Matériel supplémentaire nécessaire

•Chronomètre

•Tubes en plastique (pour un min. de 1 ml de solution)

•Pipette de 0,5 ml

•éventuellement pipette de 1 ml

•Solution de dilution appropriée (par ex. solution saline

stérile pour les aspirations)

•Cathéter ou aspirateur nasal (pour les aspirations)

6. Conservation et stabilité

Le kit NADAL® RSV doit être conservé à une température

comprise entre 4 et 30°C jusqu'à la date de péremption

indiquée sur l'emballage. Ne pas congeler les kits. Ne pas

utiliser le test au-delà de la date de péremption.

7. Précautions et mesures de sécurité

•Test réservé au diagnostic in-vitro professionnel.

•Veiller à lire attentivement la notice d'utilisation avant de

réaliser le test.

•Ne pas utiliser le test après la date de péremption indiquée

sur l'emballage.

•Ne pas utiliser le test si l'emballage est endommagé.

•Test à usage unique.

•Ne pas déposer les prélèvements sur la zone réactive

(fenêtre de résultat).

•Afin d'éviter toute contamination, ne pas toucher la zone

réactive (fenêtre de résultats) et la zone d'insertion.

•Pour chaque prélèvement, utiliser un collecteur différent

afin d'éviter tout risque de contaminations croisées.

•Ne pas interchanger ou mélanger le matériel de différents

kits.

•Nettoyer toute matière déversée avec un désinfectant

approprié.

•Ne pas manger, boire ou fumer dans la zone de

manipulation du test.

•Utiliser des vêtements de protection tels qu'une blouse de

laboratoire, des gants à usage unique et des lunettes de

protection.

•Manipuler les échantillons en les considérant comme de

potentiels réactifs infectieux. Respecter les précautions

relatives aux risques microbiologiques pendant les

manipulations ainsi que les directives locales en vigueur

concernant l'élimination des déchets.

•Ce test contient des produits d'origine animale. La

certification concernant l'origine et l'état sanitaire des

animaux ne certifie pas l'absence totale d'agents

pathogènes transmissibles. Tous les prélèvements et

matériaux utilisés pour ce test doivent être considérés

comme des matières infectieuses. Il est recommandé

d'appliquer les mesures de précaution nécessaires (ne pas

avaler ou inhaler).

•L'humidité et les fortes températures peuvent altérer les

résultats du test.

•Les composants du test doivent être éliminés selon les

directives locales en vigueur.

8. Recueil, préparation et conservation des échantillons

Remarque:

•Utiliser des échantillons provenant exclusivement d'un

lavage réalisé au niveau du naso-pharynx.

•Utiliser un aspirateur nasal ou un cathéter, afin de recueillir

les aspirations naso-pharyngées.

FRANÇAIS NADAL® RSV (Ref. 491005)

nal von minden GmbH • Carl-Zeiss-Strasse 12 • 47445 Moers • Germany • [email protected] • www.nal-vonminden.com 9

•Des prélèvements d’écouvillonnage naso-pharyngé peuvent

également être utilisés avec ce test. Ils sont cependant de

moins bonnes qualités que les aspirations naso-pharyngées.

•Si un écouvillon ne peut pas être testé immédiatement,

conserver celui-ci dans un récipient propre et sec (matériel

non fourni dans le kit). Analyser l'écouvillon dans les 24

heures.

•Ne pas utiliser de conservateur.

Aspirations naso-pharyngées

1. Après avoir recueilli les échantillons selon la procédure,

diluer l'aspiration naso-pharyngée dans une solution

appropriée (solution saline stérile) jusqu'à un volume

maximum de 3 ml.

2. Déposer 1 ml de l'échantillon dilué (ou 2 x 0,5 ml) dans un

tube en plastique et centrifuger pendant 10 minutes à

3500 tr/mn.

3. Éliminer le surnageant et remettre le culot en suspension

dans 0,5 ml de la solution tampon "Buffer". À l'aide de la

pipette, bien mélanger en pipetant de temps à autre.

4. Laisser reposer la solution tampon pendant 15 minutes

avant l'exécution du test.

Écouvillons naso-pharyngés

1. Recueillir un échantillon naso-pharyngé à l'aide d'un

écouvillon en rayon ou en dacron. Remarque: Ne pas

utiliser d'écouvillon avec embout en coton, en alginate de

calcium, avec tige en bois, imprégné de charbon ou de

milieu culturel à base d'agar ou de gélatine.

2. Immerger, immédiatement après le recueil, l'écouvillon

dans un tube en plastique contenant 1 ml de solution

tampon "Buffer" (ou 2 x 0,5 ml)

3. Laisser reposer la solution tampon pendant 15 minutes.

4. Extraire complètement le liquide de l'écouvillon en le

pressant contre la paroi du tube.

5. Éliminer l'écouvillon selon les normes en vigueur

concernant la manipulation d'agents infectieux.

9. Exécution du test

Amener les tests, les échantillons et/ou les contrôles

externes à température ambiante (15-30°C) avant la

réalisation du test.

1. Retirer la cassette de l'emballage. Utiliser la cassette

immédiatement.

2. Tenir la pipette à la verticale et

déposer 6 gouttes (200 µL) de

l'échantillon dans le puits de dépôt

de la cassette ().

3. Démarrer le chronomètre.

4. Interpréter les résultats 10

minutes après le dépôt de la

solution tampon dans le puits de

dépôt.

10. Interprétation des résultats

Positif

Deux lignes colorées apparaissent. Une

ligne colorée apparaît à hauteur de la

zone de contrôle (C), une seconde ligne

colorée apparaît à hauteur de la zone de

test (T).

Négatif

Une ligne colorée apparaît à hauteur de

la zone de contrôle (C). Aucune ligne de

couleur n'apparaît à hauteur de la zone

de test (T).

Non-valide

Aucune ligne n'apparaît à hauteur de la

zone de contrôle (C). Les tests sur

lesquels aucune ligne de contrôle n'est

apparue dans le temps d'évaluation fixé

doivent être jetés.

Contrôler la procédure d'exécution du test et répéter le test

avec une nouvelle cassette. Dans le cas où le problème

persiste, ne plus utiliser le kit du test et contacter le

distributeur.

Un volume d'échantillon insuffisant, une mauvaise

manipulation ou des tests périmés sont les principales causes

d'absence de ligne de contrôle.

11. Contrôle qualité

La cassette contient une procédure de contrôle interne.

La ligne colorée apparaissant au niveau de la zone de contrôle

confirme que le volume d'échantillon était suffisant, que la

manipulation a été correctement effectuée et que la

membrane a été suffisamment imbibée.

Les Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL) recommandent

l'utilisation de matériel de contrôle afin de confirmer la

fiabilité du test.

12. Limites du test

•Le test NADAL® RSV est réservé au diagnostic in-vitro

professionnel et à la détection qualitative du RSV dans les

prélèvements d’écouvillonnage et d’aspiration rhino-

pharyngé(e).

•Un diagnostic clinique définitif ne devrait jamais s'appuyer

sur les résultats d'un seul test. Le diagnostic devrait être

établi par un médecin après évaluation de toutes les

données de laboratoire et cliniques.

13. Performance du test

Précision

Une étude a été réalisée sur 49 échantillons d'aspirations

nasopharyngées positifs recueillis sur des enfants souffrant de

bronchiolite de type RSV (RSV A, RSV B ou RSV non-identifié)

et sur 47 échantillons d'aspiration nasopharyngée sans virus.

Les résultats obtenus avec le test NADAL® RSV ont été

comparés avec des résultats par immunofluorescence (IF)

obtenus en employant un kit IMAGEN RSV (DAKO).

Des échantillons cliniques positifs et négatifs à RSV ont été

testés avec le test NADAL® RSV et confirmés par des méthodes

immunofluorescentes et de culture.

Méthode immunoflu

orescente

Positif Négatif Total

NADAL® RSV

Positif 42 3 45

Négatif 7 44 51

Total 49 47 96

Sensibilité relative: 86% (42/49)

Spécificité relative: 94% (44/47)

FRANÇAIS NADAL® RSV (Ref. 491005)

nal von minden GmbH • Carl-Zeiss-Strasse 12 • 47445 Moers • Germany • [email protected] • www.nal-vonminden.com 10

Concordance générale : 90% (86/96)

Un échantillon, non inclu dans le tableau ci-dessus, a été testé

avec la méthode immunofluorescente et a fourni un résultat

négatif. Le résultat était positif avec le test NADAL® RSV. Le

test NADAL® RSV a été confirmé positif avec la méthode PCR.

Réactions croisées

Des aspirations naso-pharyngées contenant le virus

parainfluenza (2 échantillons), rhinovirus (7 échantillons),

adénovirus (2 échantillons) ont été testées avec le test

NADAL® RSV et ont montré des résultats négatifs à plusieurs

reprises alors que la présence des virus cités dans les

échantillons ont été confirmés soit par culture cellulaire, soit

par méthode immunofluorescente.

14. Bibliographie